[發明專利]一株枯草芽孢桿菌及其應用

在審

• 申請號: 201210328716.5
• 申請日: 2012-09-07
• 公開（公告）號: CN102816725A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 劉永鋒;陳志誼;于俊杰;劉郵洲;聶亞鋒
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;A01P1/00;C05F11/08;C12R1/125
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 程化銘

技術領域

本發明涉及一株枯草芽孢桿菌及其應用，屬于微生物領域。?

背景技術

目前，植物病害防治主要依賴化學農藥，化學農藥在農產品的安全生產中做出了巨大貢獻，但化學農藥普遍使用和農藥用量的增加產生了一系列問題，如病原菌產生抗藥性、農產品農藥殘留超標，農田生態環境污染等問題。這些問題增加了農田生產成本，同時也使本身具有優良品質的農產品因農藥的過度使用而受影響。新的防治技術和病害防治手段成為植保科技工作者探索的方向，其中利用枯草芽孢桿菌防治植物病害成為研究熱點。枯草芽孢桿菌是一種有益的土壤細菌，具有發達的分泌系統和較強的環境適應性，在農業生產中廣泛應用。枯草芽孢桿菌對多種病原菌具有拮抗性能，生產中用于防治多種植物病害。例如用來防治芒果軟腐病、辣椒炭疽病、蘋果輪紋病、水稻紋枯病、水稻白葉枯病和一些鐮刀菌引起的病害，相關研究比較深入，取得了顯著的研究進展。?

以水稻為例，受到多種病原菌的危害。植物病害水稻是我省主要的糧食作物，優質稻米在我省種植面積有擴大的趨勢，其中以粳稻類品種所占面積甚大，這些密植、大穗型、優質和高產稻米為病蟲害的發生提供了充裕的營養和繁殖條件。近年來我省水稻主要病害的發生呈現上升趨勢。稻瘟病在全省范圍內均有發生。生產上，水稻稻瘟病的防治主要以三環唑、多菌靈、還有一些以有機磷為主的化學農藥為主，有機磷類的農藥在高溫時施藥容易造成人畜中毒。江蘇省水稻稻瘟病的防治采取的是預防為主的防治思路，分別在苗期和孕穗期進行防治，大量農藥的投入，給農民造成了較大的經濟負擔，同時也對稻米的品質和稻田生態環境造成了不良影響。江蘇省水稻稻瘟病的防治面積大約在7000萬畝左右（次/年），僅每年在防治水稻稻瘟病上的開支在1.75億元人民幣，給農民造成了較大的經濟負擔，病害的發生和大量化學農藥的使用嚴重的影響了稻米品質。?

江蘇省抗白葉枯病育種已經缺乏有效的抗病基因，水稻白葉枯病在我省的淮安地區、宿遷地區和連云港均有發生。江蘇省的氣候特點適宜水稻白葉枯病菌的發生，前水稻白葉枯病防治相對較難，沒有特效藥劑，主要利用農用鏈霉素、葉菌靈、葉枯寧、消病靈、菌毒清和拌種靈等殺菌劑用來防治。農用抗菌素的使用目前也受到許多爭議。?

保障無公害、優質農產品的供給和實現資源的可持續利用是本世紀我國農業生產面臨的最大挑戰。但是，化學農藥的預防性過度使用，尤其在孕穗期使用，對稻米品質造成潛在的影響。利用生物防治技術防治水稻稻瘟病和白葉枯病，國內外均有相關研究，但未見開發出相對成熟的產品應用于生產。?

通過引進枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）控制植物病害的流行是目前植病生防研究中十分活躍的研究領域。美國已有四株枯草芽孢桿菌經環保局（EPA）批準進入商品化或有限商品化應用，如GBO3、MBI600、QST7。陳志誼，許志剛，劉永鋒等開發了新型的微生物殺菌劑“紋曲寧”，說明利用枯草芽孢桿菌防治植物病害切實可行。?

發明內容

本發明的目的在于提供一株枯草芽孢桿菌，它可以作為生物農藥防治植物多種病害，也可以作為生物肥料促進作物增產。?

本發明的目的是通過下列技術措施實現的：本發明枯草芽孢桿菌?(Bacillus?subtilis)?T-500是從南京50份水稻田土壤樣品中分離獲得，已于2012年5月2日被中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心?CGMCC受理保藏，保藏編號為：CGMCC?NO：6058?，拉丁學名為Bacillus?subtilis?T-500。其生物學性狀記載為：T-500在YPGA培養基平板上生長24h的菌落4-5mm，菌落圓形，四周光滑，米色，表面有皺褶。革蘭氏反應陽性，細胞形狀為桿狀，細胞直徑大于1μm，嚴格好氣，L－阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露醇、淀粉水解、明膠液化等利用反應均為陽性。?

本發明枯草芽孢桿菌?(Bacillus?subtilis)?T-500的培養方法，包括如下步驟：?

1)、菌株活化：將枯草芽孢桿菌T500移入YPGA斜面培養基上，在28-32℃下培養24~72h；

2)、種子培養：將步驟1)活化后的菌株，移入YPG培養液中，?120轉/分，28-32℃下培養24~72h；

3)、發酵培養：將步驟2)中種子罐中的發酵液壓入發酵罐發酵，發酵溫度為28-32℃；轉速：適當；酸堿度7.0-7.4，待到菌體有90%變為芽孢后，檢測菌含量達到2×10¹⁰cfu/ml時出罐。