[發(fā)明專利]一種RT-PCR法診斷溫石棉及人造礦物纖維致肺部病變的引物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210328425.6
• 申請日: 2012-09-07
• 公開（公告）號: CN102827938A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張幸;武為;肖蕓;朱麗瑾;馮玲芳;張敏
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省醫(yī)學科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種引物，尤其涉及一種診斷溫石棉及人造礦物纖維所致肺部病變的引物。

背景技術(shù)

石棉是天然纖維狀的硅酸鹽類礦物質(zhì)，由于具有耐熱、保溫、耐磨、電絕緣以及耐化學腐蝕等優(yōu)良的性能，多年來被廣泛應用于石棉水泥、紡織品、絕緣摩擦材料等的制造。石棉種類較多，根據(jù)化學組分的不同可分為角閃石石棉(包括青石棉、鐵石棉等)和蛇紋石石棉(溫石棉)兩大類。石棉由于其纖維狀的特性，被人體吸入后，附著并沉積在肺部，能夠?qū)е路卫w維化、間皮瘤和胸膜斑等的發(fā)生。石棉家族中危害最大的是青石棉，它具有較強的致癌性，在大多數(shù)國家已被禁用。而溫石棉具有柔軟且不耐酸的特性，與堅硬而耐酸堿的角閃石石棉相比，在人體內(nèi)的持久性較差，易清除出體外，因此其危害相對較小。然而有關(guān)溫石棉安全性的多項流行病學研究和毒理學研究都提示我們溫石棉潛在的生物學危害不容忽視。溫石棉接塵工人的肺功能指標(包括FVC、FEV1等)較非接塵人群均有所下降。長時間暴露于低劑量的溫石棉可引起胸膜斑的發(fā)生，溫石棉暴露也可導致胸膜鈣化，引起纖維化病變和石棉肺的發(fā)生。單純溫石棉暴露能夠引起接塵人群肺癌和間皮瘤的高發(fā)，溫石棉已被認為是間皮瘤發(fā)病的主要原因。大量有關(guān)哺乳動物的接塵實驗證實溫石棉能夠?qū)е路尾垦装Y反應、石棉小體的產(chǎn)生以及纖維化病變發(fā)生。

目前在全世界范圍內(nèi)溫石棉的生產(chǎn)和使用已經(jīng)逐漸遭到限制或禁止，與此同時各國也在積極開展石棉替代品的生產(chǎn)使用、危害及防護措施研究。人造礦物纖維(man-made?vitreous?fibers，MMVFs)是一類由玻璃、巖石、礦渣或其他經(jīng)過加工的礦物材料等作為原料生產(chǎn)得到的非晶體結(jié)構(gòu)的纖維狀硅酸鹽物質(zhì)，在形態(tài)和性能等方面與石棉較為相似，因此也做為石棉替代品廣泛應用。人造礦物纖維的生產(chǎn)和應用發(fā)展很快，目前常用的包括耐火陶瓷纖維、玻璃纖維、巖棉等，隨著近年來的大量生產(chǎn)以及廣泛應用，它們對人體健康的危害也引起了人們的廣泛關(guān)注。早在耐火陶瓷纖維商業(yè)化生產(chǎn)后不久就有研究通過體腔注射的方法證實了耐火陶瓷纖維能夠引起大鼠體內(nèi)間皮瘤的發(fā)生。長期吸入實驗進一步證實耐火陶瓷纖維主要損傷大鼠和倉鼠的肺部組織，吸入3個月后能夠觀察到巨噬細胞浸潤、肺泡外上皮細胞異常增生以及肉芽腫的形成，6個月后可觀察到明顯的局灶性胸膜纖維化。一些研究小組提供的細胞動力學和生化數(shù)據(jù)卻表明玻璃纖維能夠在小鼠和倉鼠體內(nèi)引起纖維化反應。Takahashi研究小組與Guber等人分別于1996年和2006報道了一例長期吸入玻璃纖維誘發(fā)的肺纖維化病變。McConnell等人于1999年進行了一項關(guān)于巖棉的致病性研究，通過粉塵吸入實驗，觀察到倉鼠肺部纖維化現(xiàn)象的出現(xiàn)。

呼吸性粉塵可經(jīng)呼吸道進入肺部引起大量肺泡巨噬細胞游出，這一過程中不僅引發(fā)了氧自由基等產(chǎn)生，破壞細胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，還可刺激肺泡巨噬細胞、中性粒細胞等分泌各種細胞因子，這些細胞因子可以通過受損的肺泡上皮進入到肺間質(zhì)，作用于相應的靶細胞從而引起它們的病理改變。當細胞因子作用于成纖維細胞，促使細胞大量增殖，或誘導細胞外基質(zhì)蛋白表達增強，導致成纖維細胞大量增殖和膠原等細胞外基質(zhì)蛋白的大量沉積，還可引起肺纖維化的產(chǎn)生。呼吸性粉塵致肺部病變的機制非常復雜，而且潛伏期較長，目前尚無有效的方法對其進行早期評估和早期篩查。

近年來microRNA(miRNA)已經(jīng)成為一類重要基因表達調(diào)控分子，具有廣泛多樣的生物功能。miRNA在線蟲中首次被發(fā)現(xiàn)，參與幼蟲的發(fā)育調(diào)控。成熟miRNA分子的形成過程包括若干步驟：首先通過RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄合成原始miRNA(pri-miRNA)，經(jīng)核酸酶Drosha酶切產(chǎn)生具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體(pre-miRNA)；pre-miRNA通過轉(zhuǎn)運子Exportin?5從核內(nèi)轉(zhuǎn)移到胞質(zhì)中，經(jīng)Dicer酶剪切后形成一條成熟的約22個核苷酸組成的小分子RNA，即成熟的miRNA分子。成熟的miRNA與Argonaute蛋白家族的成員組裝成核酸蛋白復合體miRNP，通過與靶標mRNA?3’端非翻譯區(qū)序列結(jié)合引起靶標mRNA的降解或翻譯抑制。