[發明專利]一種恢復間充質干細胞全能性的方法

有效

• 申請號: 201210326437.5
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN103667186A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 吳耀炯;郭玲;周瑩
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種恢復間充質干細細胞全能性的方法，包括如下步驟：

1）將全能性降低的離體間充質干細胞懸滴培養，得到懸滴培養后的細胞；

2）將所述懸滴培養后的細胞繼續懸浮培養，實現恢復所述全能性降低的離體間充質干細胞全能性。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述全能性降低的離體間充質干細胞為將離體間充質干細胞經體外擴增得到的間充質干細胞。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：

所述體外擴增培養為傳代培養4-10代；所述傳代培養具體采用貼壁培養的方式。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述懸滴培養包括如下步驟：將所述全能性降低的離體間充質干細胞懸浮，得到細胞懸液；再將所述細胞懸液滴加在培養皿蓋上，再將滴加后的蓋倒置在培養皿底上，培養，得到懸滴即為懸滴培養后的細胞；

所述細胞懸液的濃度具體為10⁴-10⁸個/mL。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：

所述懸滴培養還包括如下步驟：在所述培養前，向所述培養皿底中加入防止懸滴干燥的水或溶液；所述溶液為濃度為0.01M、pH值為7.4的PBS緩沖液、生理鹽水、細胞培養液或其它緩沖液。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于：

所述培養皿為細胞或細菌培養皿；所述細胞或細菌培養皿的材質具體為塑料或玻璃。

7.根據權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

所述懸滴培養中懸浮采用的懸浮液和所述懸浮培養采用的培養基均為細胞培養基或含有如下1）-3）中至少一種組分的細胞培養基：

1）促進細胞生長組分：血清、生長因子、細胞因子、微量元素、激素、維生素、細胞信號通路抑制劑和/或激活劑；

2）助于細胞附著的組分：膠原、明膠、透明質酸、纖維素、硫酸軟骨素、肽、甲殼素、聚乳酸和/或水凝膠；

3）抗病原體感染的組分：抗生素。

8.根據權利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：

所述懸滴培養的時間為2-110小時；

所述懸浮培養的時間為2-110小時；

所述懸滴培養和所述懸浮培養的條件如下：氧濃度為0.1-50%，CO₂濃度為1-15%，溫度為30-40°C；

所述懸滴培養和所述懸浮培養均為靜態培養或動態培養；所述動態培養的方式為攪拌、旋轉或震蕩。

9.根據權利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：

所述恢復所述全能性降低的離體間充質干細胞全能性體現在減小所述全能性降低的離體間充質干細胞的體積、降低所述全能性降低的離體間充質干細胞S期的細胞數量、增強所述全能性降低的離體間充質干細胞的分化能力、增強所述全能性降低的離體間充質干細胞的克隆能力和/或提高所述全能性降低的離體間充質干細胞中與全能性相關基因表達；

所述與全能性相關基因為CCR1、CCR2、CX3CR、CD49b、CXCR4、OCT4、SOX2和/或NANONG。

10.由權利要求1-9中任一所述的方法得到的間充質干細胞；

或一種間充質干細細胞培養方法，包括權利要求1-9中任一所述的方法的步驟。