[發明專利]一種綠僵菌發酵生產酯酶的培養基及方法

有效

• 申請號: 201210319225.4
• 申請日: 2012-09-03
• 公開（公告）號: CN102839161A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 邱君志;蘇禮超;涂潔;宋飛飛;關雄;邱云鋒;李小霞;郭慶豐;何肖云;吳國輝
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及真菌的發酵培養基及工藝。更具體地，本發明涉及一種綠僵菌發酵生產酯酶的培養基及方法。

背景技術

酯酶（Esterase，EC3.1.1.1）是一類能夠催化酯鍵水解形成相應的酸和乙醇的酶類，廣泛分布于動植物和微生物(Bronscheuer，2002)。微生物能夠產生多種具有酯解活力的酶類，包括酯酶(Esterase)和脂肪酶(Lipase)。酯酶能夠水解或者合成酰基碳鏈長度小于10的甘油酯類，對于酰基碳鏈長度大于10的甘油酯類則沒有催化活性。

酯酶催化反應具較廣的底物范圍，在催化底物反應時不需要輔助因子，在一些變形劑，如有機溶劑中有很高的穩定性，此外酯酶催化反應具有立體特異性和區域專一性的特點。由于酯酶以上優點，使得酯酶在很多領域有著廣泛的應用。近年來，全球市場工業用酶市場不斷擴大，而酯酶是其中一種被廣泛使用的生物催化劑，在全球工業用酶市場占據很高的很高比例。隨著日益高漲的能源成本、石油煤炭等不可再生資源的衰竭、環境污染以及經濟全球化，大規模的可再生的，環保的生物處理工藝來代替或者互補傳統不可再生，高能耗，高污染的工業生產工藝是刻不容緩。

在食品加工方面，利用酯酶分解底物后產物為呈香化合物，將酯酶己應用于奶制品的增香、改善稻米和發酵類飲料的香味等方面，如用酯酶處理過的奶制品比未處理的具有更好的香味和可接受性；在農業生產方面，人工合成的有機磷化物廣泛用于殺蟲劑，這些物質的殘留將危害環境并且最終危害人類健康，來自于Brevundimonas?diminuta和Alteromonas?sp.酯酶被證明能有效降解這類物質，廣泛應用于清除有機磷殺蟲劑的污染；在醫藥合成方面，酯酶主要用于拆分手性藥物。來自于Pseudomonas?sp.的酯酶被應用于抗炎藥物布洛芬的生產，來自于Bacillus?cogulans的酯酶廣泛應用于生物活性物質DL-甘油醇縮丙酮的生產；在輕化工業方面，酯酶廣泛應用于制漿造紙、紡織品、皮革處理等。來自于Ophiostoma?piceae的酯酶能夠有效的水解甘油三酯和幽醇酯，酯酶能夠顯著降低制漿造紙過程中的樹脂，因而能夠顯著提高機器的運行效率并改善紙張的品質，因而廣泛應用于制漿造紙工業；化工日用品方面，堿性酯酶具有明顯的助洗作用，加入后使得洗滌劑朝低磷或無磷的方向反應，有利于降低水體中無機磷含量，從而減少環境水體富營養化。酯酶除了在上述的食品加工、農業生產、醫藥合成以及輕化工業等行業廣泛使用外，酯酶還被認為在環保型燃料、生物柴油等生物能源的開發具有廣泛的前景。

微生物酯酶是一類重要的工業酶類，國內外上從20世紀90年代到現在，相繼開發出各種酯酶，但是依舊無法滿足現代工業需求。我國真菌產酯酶的相關研究起步較晚，在期刊雜志上鮮有報道，覃擁靈等人利用誘變裂褶菌ZM37.8，獲得穩定的正突變高產菌株E1，其產酯酶量為87.56U/mL（覃擁靈等，2007）。真菌發酵有別于細菌發酵，真菌在發酵過程中可以隨時取樣接種于LB培養基，檢測是否染雜菌；也可通過添加抗生素減少染菌，且真菌發酵條件溫和，易于控制等鮮明特點。因此真菌發酵法生產的獨特優勢，有利于真菌酯酶更廣泛地工業化應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種綠僵菌發酵生產酯酶的培養基及方法。

本發明首先提供了一種綠僵菌發酵生產酯酶的培養基，所述培養基的原料含有酵母粉1-3w%，D-山梨醇1-4?w?%，Ba²⁺?0.01-0.04?mol/L，VB₄0.005-0.02?w?%，三醋酸甘油酯2w%，培養基初始pH=6.6-7.5。

更優選地，所述培養基的原料按重量分數計，含有酵母粉2%，D-山梨醇3%，BaCl₂·2H₂O?0.24%，VB₄0.01%，三醋酸甘油酯2%，培養基初始pH=6.9。

其次，本發明還提供了一種綠僵菌發酵產酯酶的方法，所述方法包含以下步驟：

（a）將綠僵菌接種種子培養基，制得發酵種子液；

（b）將步驟（a）中制得的發酵種子液按接種于權利要求1或2所述的培養基，250mL的三角瓶裝液量為125mL，接種量10%，于27℃，轉速160?r/min下培養。