[發(fā)明專利]萬古霉素菌株及其發(fā)酵產萬古霉素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210318843.7
• 申請日: 2012-09-03
• 公開（公告）號: CN102899268A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發(fā)明（設計）人: 蔡志強;朱孝霖;楊廣花;趙希岳
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/02;B09C1/10;C12R1/01
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術領域

本發(fā)明涉及一種微生物的篩選、分離，尤其是涉及擬無枝酸菌菌株M3-1(Amycolatopsis?sp.?M3-1)的發(fā)酵產萬古霉素，屬于生物制藥技術領域。

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背景技術

萬古霉素（Vancomycin）是一種糖肽類抗生素，由放線菌發(fā)酵產生的最具有典型代表的一種糖肽類抗生素，1956年由Micormick等從印尼土壤中篩選得到一株東方方擬無枝酸菌，從其發(fā)酵液中首次分離提取，并鑒定為萬古霉素。主要有于治療革蘭氏陽性菌引發(fā)的感染，特別是對內酰胺類抗生素引起的耐藥金黃色葡萄球菌引發(fā)的感染具有很好的療效，被醫(yī)學專家稱為“人類對付頑固性耐藥菌株的最后一道防線”和“王牌抗生素”。萬古霉素作用機制是抑制G⁺菌細胞壁中的磷脂和多肽的生成，從而抑制細菌的生長與繁殖。

近年來，由于內酰胺類抗生素的廣泛使用，造成大量的內酰胺類抗生素抗性G⁺細菌感染，而目前萬古霉素已經成為對產生耐藥性細菌治療的最后一道防線，1958年美國禮萊公司開發(fā)出第一個萬古霉素藥物并獲FDA批準上市，但由于萬平霉素有較強的腎、耳毒性，萬古霉素并未廣泛使用，但隨著抗藥性細菌以及超級細菌的出現(xiàn)，萬古霉素已經得到廣泛的臨床應用，1999年全球萬古霉素銷售近30噸，居全球抗生素的第23位，國際市場需求量仍維持在年增長3~4%。

目前萬古霉素的生產主要是通過培養(yǎng)、發(fā)酵東方擬無枝酸菌(Amycolatopsis?orientalis)或地中海擬無枝酸菌（Amycolatopsis?mediterranei）而獲得，現(xiàn)階段我國的萬古霉素生產的廠家不多，產萬古霉素菌株均購自美國，國內發(fā)酵水平在3-6g/L，

發(fā)明內容

本發(fā)明為了克服上述不足，從常州市南郊的麥田中采集土樣，進行微生物的篩選、培養(yǎng)、鑒定、獲得萬古霉素菌株M3-1,建議的分類命名為擬無支酸菌Amycolatopsis??sp.該菌株已于2011年9月9日保藏于位于中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），保藏編號為CGMCC?No.?5238。

該菌株M3-1在發(fā)酵抗生素的應用，可應用本發(fā)明的菌株M3-1發(fā)酵生產萬古霉素。

利用上述萬古霉素菌株M3-1??Amycolatopsis?sp.發(fā)酵產萬古霉素的方法，按照下述步驟進行：

將菌株Amycolatopsis?sp.?M3-1進行液體發(fā)酵，種子培養(yǎng)基為牛肉膏3~8g/L，蛋白胨8~15g/L，NaCl?3~5g/L，pH?6.5~7.2；培養(yǎng)條件為25~32℃，120～200rpm，培養(yǎng)24~72h；發(fā)酵培養(yǎng)基為：糊精50g~100g/L，馬鈴薯100g~200g/L，玉米漿15~50g/L，黃豆粉20~35g/L，氯化鈉?1.0~2g/L，磷酸氫二鉀?0.1~0.3g/L，pH?6.6~7.2；發(fā)酵條件為：溫度為26℃~30℃，pH為6.5～8.0，轉速80～200rpm，通氣量2～8L/h，培養(yǎng)時間90~140h；發(fā)酵液中萬古霉素產率可達2.8~4.9g/L。

該菌株M3-1在環(huán)境修復中的應用，可應用本發(fā)明的菌株M3-1生物修復嘧啶水楊酸類農藥污染土壤。

????本發(fā)明的優(yōu)點，從自然界中自主選育獲得一株擬無枝酸菌Amycolatopsis?sp.萬古霉素生產菌株M3-1，該菌株的生產能力比目前報道的菌株高1.27倍，生產性能穩(wěn)定，并且該菌株還可生物修復被嘧啶水楊酸類農藥污染的土壤，有效提高農產品產量，降低該農藥在土壤的殘留。

具體實施方式

本發(fā)明從常州市南郊的麥田中采集土樣，歷時3年，進行微生物的篩選、培養(yǎng)、鑒定、發(fā)酵條件初步優(yōu)化，最終獲得萬古霉素菌株M3-1,建議的分類命名為擬無支酸菌Amycolatopsis??sp.該菌株已于2011年9月9日保藏于位于中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），保藏編號為CGMCC?No.?5238。