[發明專利]一種穩定同位素標記孔雀石綠的合成方法

有效

• 申請號: 201210313832.X
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102796025A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 楊超;楊維成;羅勇;李美華
• 申請（專利權）人: 上海化工研究院
• 主分類號: C07C251/30
• 分類號: C07C251/30;C07C249/02
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 林君如

技術領域

本發明涉及同位素標記領域，尤其是涉及一種同位素內標檢測試劑穩定同位素標記孔雀石綠的合成方法。

背景技術

孔雀石綠作為殺菌劑曾被廣泛使用于魚類養殖業中。孔雀石綠中的化學功能團三苯甲烷可致癌，很多國家已經禁用，但仍有漁民在防治魚類感染真菌時使用，也有運輸商用作消毒劑，以延長魚類在長途販運中的存活時間。為防止孔雀石綠等三苯甲烷類化合物殘留進入食物鏈，養殖者和政府監控部門需要一種能夠快速、準確并很敏感的技術來檢測它。

用來檢測這類三苯甲烷類化合物的主要檢測技術有高效液相色譜法、薄層色譜法、分光光度法和高效液相色譜串聯質譜法。高效液相色譜法的靈敏度高，但是該方法繁瑣，故該方法已經很少使用。薄層色譜法操作簡便快捷，但不能同時檢測孔雀石綠和隱色孔雀石綠。分光光度法的檢測限很高，但檢測的靈敏度較低，準確性很差。而質譜作為目前發展最快的檢測技術，在各類殘留檢測中應用逐漸普及，成為分析和確證實驗室必備的檢測儀器。由于質譜能夠同時提供定性和定量信息，因此發達國家對于食品、飼料中的殘留均要求用質譜法來進行檢測，并對相關判定標準進行了詳細的規定如歐盟的2002/657/EC指令。

穩定同位素稀釋質譜法IDMS(Isotope?Dilution?Mass?Spectrometry)是采用與被測物質具有相同分子結構的穩定同位素標記的化合物作為內標物質，用高分辨液相色譜一質譜聯用儀(LC/MS)進行檢測，通過質譜儀測量相應質量數的離子的比值并與標準的比值比較達到準確定量的目的。采用同位素內標可以有效消除樣品在化學和物理的前處理步驟中所引起的回收率差異，從而避免因為樣品處理過程的損失對檢測結果造成的偏差。

穩定同位素內標的這種特性與LC/MS的高靈敏度和處理復雜樣品的能力結合起來，使得色譜/同位素稀釋質譜技術被公認為是一種測量微量及痕量有機物的基準方法。而穩定同位素標記三苯甲烷類化合物穩定同位素標記隱色孔雀石綠、孔雀石綠的開發成功，將為更準確的定量檢測隱色孔雀石綠、孔雀石綠提供標準試劑，從而有效地為我國食品安全領域獸藥殘留檢測服務。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種過程簡單、分離提純容易的穩定同位素標記孔雀石綠的合成方法。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

穩定同位素標記孔雀石綠的合成方法，利用穩定同位素標記的N，N-二甲基苯胺與聯結劑、苯甲醛反應，后通入NO和NO₂的混合氣體，反應結束后經分離、提純，得到穩定同位素標記的孔雀石綠。

所述的穩定同位素標記的N，N-二甲基苯胺為N，N-二甲基苯胺-¹⁵N、N，N-二甲基苯胺-¹³C₂或N，N-二甲基苯胺-D₆。

N，N-二甲基苯胺-¹⁵N標記的孔雀石綠-¹⁵N₂的分子結構為：

N，N-二甲基苯胺-¹³C₂標記的孔雀石綠-¹³C₄的分子結構為：

N，N-二甲基苯胺-D₆標記的孔雀石綠-D₁₂的分子結構為：

孔雀石綠的合成具體包括以下步驟：將穩定同位素標記的N，N-二甲基苯胺與聯結劑、苯甲醛按一定摩爾比例混合，置于液相環境中，在催化劑作用下，在一定壓力下，控制反應溫度反應一定時間，后又通入NO和NO₂的混合氣體，反應液經分離提純后得到穩定同位素標記的孔雀石綠。

所述的穩定同位素標記的N，N-二甲基苯胺與聯結劑的摩爾比為2∶1～4∶1；所述穩定同位素標記的N，N-二甲基苯胺與苯甲醛按摩爾比為1∶1～3∶1；所述的聯結劑包括尿素、多聚甲醛或醋酸甲脒；所述的液相環境為鹽酸、乙酸、乙酸酐、丙酮、乙腈或二氧六環中的一種或幾種；所述的催化劑選自三辛基甲基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨、芐基三乙基氯化銨、四丁基溴化銨、四丁基氯化銨或四丁基硫酸氫銨中的一種或幾種；催化劑與穩定同位素標記的N，N-二甲基苯胺的重量比為0.01∶1～0.2∶1；反應壓力為0～5MPa；反應溫度為10～190℃；反應時間為2～16h。