[發明專利]一種在幼蟲期鑒別家蠶吐絲顏色的方法

有效

• 申請號: 201210312215.8
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102808033A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 徐世清;牛艷山;司馬楊虎;陳息林;殷為民;袁紅霞;邢瑞
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

1.一種在幼蟲期鑒別家蠶吐絲顏色的方法，其特征在于，

提取待測5齡期家蠶絲腺RNA，反轉錄方法合成cDNA，以獲得的cDNA為模板用具有SEQ?ID?NO：1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ?ID?NO：2所示核苷酸序列的下游引物進行RT-PCR擴增，瓊脂糖電泳檢測PCR擴增產物，判斷家蠶吐絲顏色；

若僅具有一條SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列,或者同時具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列和SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列，則家蠶吐黃色繭絲；若僅具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列，則家蠶吐綠色繭絲或者白色繭絲。

2.根據權利要求1所述鑒別方法，其特征在于，還包括與具有SEQ?ID?NO：5所示的核苷酸序列內參基因ActinA3的RT-PCR擴增產物光密度值比較，判斷家蠶吐綠色繭絲還是白色繭絲；

若具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶的光密度值與內參基因Actin?3電泳條帶的光密度值的比值＞0.8，則家蠶吐綠色繭絲；若具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶的光密度值與內參基因Actin?3電泳條帶的光密度值的比值≤0.4，則家蠶吐白色繭絲。

3.根據權利要求1所述鑒別方法，其特征在于，還包括利用具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶與具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶的光密度比值，判斷家蠶為純合型吐黃色繭絲還是雜合型吐黃色繭絲；

若具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶與具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶的光密度比值＞3則家蠶為純合型吐黃色繭絲。

4.根據權利要求1所述鑒別方法，其特征在于，利用具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶與具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶的光密度比值，判斷家蠶吐黃色繭絲的色度和色牢度；

若具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶與具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的RT-PCR擴增產物電泳條帶的光密度比值＞5則家蠶吐黃色繭絲的色度高和色牢度高。

5.一種在幼蟲期鑒別家蠶吐絲顏色的試劑盒，其特征在于，包括具有SEQ?ID?NO：1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ?ID?NO：2所示核苷酸序列的下游引物。

6.一種在幼蟲期鑒別家蠶吐絲顏色的DNA分子組，其特征在于，由具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列或其互補序列的DNA分子和具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或其互補序列的DNA分子組成。