[發明專利]一種低分子量透明質酸的制備方法

無效

• 申請號: 201210311434.4
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102850467A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 張樣柏;孫廷華;張京良;王文艷
• 申請（專利權）人: 山東眾山生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

技術領域????

本發明涉及透明質酸技術領域，特別涉及一種低分子量透明質酸的制備方法。

背景技術???

透明質酸(hyaluronic?acid，HA)是一種酸性粘多糖，是由（1-β-4）D-葡萄糖醛酸和（1-β-3）N-乙酰基-D-氨基葡萄糖雙糖重復單位所組成的直鏈多聚糖，廣泛分布于脊椎動物的各種組織細胞間質中，在雞冠、眼玻璃體、臍帶、皮膚和滑液中含量較高。在鏈球菌的莢膜中也有分布。HA具有高度的粘彈性、獨特的保濕性、優良的生物相容性和可降解性，被廣泛應用于化妝品行業。最近的研究表明，通過口服含有透明質酸的食品，可以補充體內因降解而導致不足的HA，有改善皮膚彈性及柔韌性等效果。

但由于HA是大分子多糖，具有很大的分子量和很大的粘性，因此當將HA添加到化妝品或食品中的量超過規定量時，化妝品或食品的粘度會大幅上漲，影響產品的外觀狀態、口感及使用。因此，為提高HA在化妝品或食品中的用量及研究低分子量HA的功能和應用，國內外已有多家公司或研究機構對降低HA的分子量的方法進行了研究。目前已有報道的降解方法有：機械力剪切法、超聲波降解法、γ-射線、高溫降解法、過氧化氫降解法、酶解法、酸解法等。但所有這些方法在大規模工業化生產過程中都具有其局限性。如機械剪切法、超聲波、γ-射線等方法操作麻煩，需要大量設備或儀器，消耗的動力、能量多，成本高；熱降解法操作時間較長，分子量降到一定程度后基本不變，且容易引起變色；酶解法反應條件溫和，容易控制、產物均一，產品質量好，但需要后續步驟滅酶及除酶，且沒有工業化的透明質酸酶，實驗室用酶價格高，活力低，成本極高；酸解法會引起設備和管路的腐蝕,?給設備維護和清潔造成很大不便，需要特殊的搪瓷或者PVC設備，且所得產品的紅外圖譜顯示分子結構發生了變化，產品質量有所下降。

發明內容???

為了解決上述各種HA降解方法存在的問題，本發明提供了一種降解調節溫和、降解效率高、降解后分子量可控的低分子量透明質酸的制備方法。本發明是通過以下措施實現的：

一種低分子量透明質酸的制備方法，將堿溶液加入有機溶劑中提供一個堿性環境，然后加入透明質酸或透明質酸鹽，在40-70℃反應降解一定時間，反應得到的固體產物經過脫色除雜，即得到低分子量透明質酸或低分子量透明質酸鹽。通過在有機溶劑的環境中降解，比起在水環境中，操作步驟簡單、易實現，得到的產品色澤更好，并且在有機溶劑中反應，降解效果更好，可得到更小分子量的透明質酸或其鹽。

所述的制備方法，有機溶劑為甲醇、乙醇或丙酮。

所述的制備方法，使用堿溶液中的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨，堿溶液加入有機溶劑后整個體系的堿的濃度為0.05M-0.2M。?

所述的制備方法，反應降解后透明質酸或透明質酸鹽的分子量為10kDa到400kDa。

所述的制備方法，反應降解時間為4-12h。

所述的制備方法，向100mL濃度為90%的乙醇中加入NaOH溶液，整個體系中NaOH濃度為0.05M，秤取10g分子量為1.42?MDa的透明質酸鈉，在攪拌下加至預熱的乙醇溶液中，于50℃攪拌反應2h，經過后處理步驟，得到分子量為362?KDa的透明質酸鈉。

所述的制備方法，向500mL?90%的乙醇中加入KOH溶液，整個體系中KOH濃度為0.11M，秤取50g分子量為1.57?MDa的透明質酸，在攪拌下加至預熱的乙醇溶液中，于60℃水浴中攪拌反應10h，得到分子量為14KDa的透明質酸。

所述的制備方法，向200mL?90%的丙酮中加入NaOH溶液，整個體系中NaOH濃度為0.2M，秤取30g分子量為1.57?MDa的透明質酸鈉，在攪拌下加至預熱的丙酮溶液中，于55℃水浴中攪拌反應6h，得到分子量為63KDa的透明質酸。

所述的制備方法，使用過氧化氫脫色，脫色工藝為將反應得到的固體產物溶解后，加入0.5-5%的過氧化氫溶液，調節pH至9.0-11.5，升溫到30-60℃攪拌反應0.5-2h。

所述的制備方法，使用過氧化氫脫色之后，再使用活性炭吸附脫色除雜，具體工藝為調節溶液pH至5.0-8.0，加入適量活性炭攪拌吸附0.5-2h，經過沉淀，脫水、抽濾、干燥得產品。