[發明專利]一種利用離體葉片鑒別辣椒耐熱性的方法

無效

• 申請號: 201210310673.8
• 申請日: 2012-08-28
• 公開（公告）號: CN102805010A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 鞏振輝;馬寶鵬;趙瀅;崔春梅;郭猛;逯明輝
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

技術領域

本發明屬于蔬菜育種領域，具體涉及利用辣椒離體葉片區分不同耐熱性辣椒種質資源的一種方法，特別是涉及辣椒離體葉耐熱性鑒定，以及辣椒離體葉耐熱性分級體系建立的方法。該方法不會造成不耐熱植株死亡，便于不耐熱株系留種與后代遺傳分析，特別適宜于株系群體小，以及轉基因株系等珍貴辣椒育種品系的耐熱性鑒定與遺傳分析，是一種操作簡單、快速、有效鑒定大量辣椒種質資源耐熱性的方法。

背景技術

辣椒（Capsicum?annuum?L.）是典型的“喜溫不耐熱”植物，超過32℃就會發生熱脅迫，引起嚴重的授粉受精不良和落花落果，坐果率降至10%～20%，導致產量銳減，目前全球氣候有明顯地變暖趨勢，嚴重影響辣椒的品質和產量，尤其是我國長江以南地區夏季酷熱，辣椒在越夏生產中面臨著高溫脅迫的嚴峻挑戰。

辣椒耐熱新品種的選育是防治或減輕其熱脅迫危害的有效途徑。準確鑒定辣椒的耐熱性是研究辣椒熱脅迫和提高辣椒耐熱性的重要基礎。目前，鑒定辣椒耐熱性的常用方法有田間鑒定、人工模擬逆境鑒定法，以及逆境生理鑒定法等，其中：

田間鑒定受環境條件影響很大，結果重演性差，所需時間長，工作量大；

人工模擬逆境鑒定法需一定的設施條件，難以大批量進行；

逆境生理鑒定是一種間接鑒定方法，其可靠性較差。

上述現有這些鑒定方法費時費力，效率較低，特別是對于一些可供鑒定樣品較少的品系和轉基因株系，更是具有很大的局限性。

以下是相關的參考文獻：

Cloning?and?Expression?under?Heat?Stress?of?A?Small?Heat?Shock?Protein?Gene?CaHSP24?from?Pepper.Wei?Zhu,Minghui?Lu,Zhenhui?Gong,and?Rugang?Chen.African?Journal?of?Biotechnology,2011,10(25)：4968-4976。

發明內容

針對現有技術中存在的不足之處，本發明的目的在于，提供一種利用離體葉片鑒別辣椒耐熱性的方法，該方法步驟簡單快捷、穩定可靠，鑒別結果與田間自然鑒定結果一致、重復性好，特別適用于株系群體小，以及轉基因株系等珍貴辣椒育種品系的耐熱性鑒定與遺傳分析，能夠很好地提高辣椒耐熱性篩選效率，加速育種進程。

為了實現上述任務，本發明采用如下的技術解決方案：

一種利用離體葉片鑒別辣椒耐熱性的方法，其特征在于，該方法利用辣椒7～8葉幼苗期離體帶柄功能葉，在人工氣候箱中進行耐熱性鑒定，通過計算待檢某一品系群體的熱害指數，并根據創制的群體熱害分級標準，能鑒定出辣椒的耐熱性。具體步驟如下：

1）選擇辣椒耐熱品系B35為耐熱對照，辣椒不耐熱品系B6作為熱敏對照（Wei?Zhu,Minghui?Lu,Zhenhui?Gong,and?Rugang?Chen.Cloning?and?Expression?under?Heat?Stress?of?A?Small?Heat?Shock?Protein?Gene?CaHSP24?from?Pepper[J].African?Journal?of?Biotechnology,2011,10(25):4968-4976）。

2）將耐熱性未知的待檢辣椒材料種子，以及耐熱對照和熱敏對照的種子分別經55℃溫湯浸種20min，清水浸泡5h，28℃，全黑暗人工氣候箱中進行催芽；經4d種子露白，播于穴盤中。然后將穴盤置于晝夜溫光周期條件下進行培養，所述的晝夜溫光周期條件為：相對濕度50%～70%，光照3000～4000lx，白天溫度25℃～30℃，16h，夜間溫度18℃，8h，培養期間澆Hoagland's營養液。

3）待幼苗長至7～8片真葉時，選取辣椒子葉上方第4、5、6片生長正常的帶柄功能葉作為鑒定其耐熱性的樣品，每個待檢辣椒品系供試離體葉樣品10片，重復3次。

4）將采集的辣椒功能葉按待檢辣椒品系編號，插入裝滿蒸餾水的250mL三角瓶中（三角瓶壁上用記號筆標明待檢辣椒品系編號）。然后，將插有待檢樣品的三角瓶立即置于38℃的光照培養箱中，光照3000～4000lx，連續光照處理60h后，統計熱害指數。在鑒定期間，每天檢查三角瓶中水位并及時補加蒸餾水，使離體的辣椒功能葉的葉柄一直浸在水中。

5）按照以下辣椒離體葉片耐熱性鑒定分級標準統計待檢辣椒品系葉片級數：

0級：全葉青綠，無熱害癥狀；

1級：葉片失水，輕度萎蔫；