[發明專利]一種小牛血去蛋白提取物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210305117.1
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號: CN102846664A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 鄧霞飛;劉紅華;李青;盧山;陸毅;高光田
• 申請（專利權）人: 武漢人福藥業有限責任公司
• 主分類號: A61K35/14
• 分類號: A61K35/14;A61P9/10;A61P25/00;A61P17/02
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 張瑾

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種小牛血去蛋白提取物及其制備方法，以及小牛血去蛋白提取物在制劑中的應用。

背景技術

小牛血去蛋白提取物由Jaeger?KH于20世紀60年代研制成功,?主要由無機離子鉀、氯、鈉等及小分子多肽、氨基酸、核苷酸、酮酸等物質組成，能夠促進細胞對葡萄糖和氧的攝取和利用，促進線粒體呼吸，促進組織的復原和再生，能保護大腦神經細胞，減輕腦缺血再灌注損傷，改善大腦中氧和能量供應，消除氧自由基、促進神經細胞修復等作用。特別對中風、顱腦外傷等器質性精神障礙有特殊的療效，對創傷、潰瘍、灼傷等損傷組織也有促進愈合的作用。小牛血去蛋白提取物進口制劑如瑞士素高公司生產的素高捷療眼膏、奧地利奈科明的愛維治已進入中國市場，國產制劑生產商也有數家，如錦州奧鴻藥業有限責任公司、黑龍江江世藥業有限公司、吉林康乃爾藥業有限公司等等，其中制劑原料有來自血清、全血、紅細胞三種形式。

專利96120777、200510132478.0公開了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括：采幼牛靜脈血，分離出血清，用乙醇去蛋白，減壓去除乙醇，加入復合蛋白酶水解，離心分離留上清，將上清液中的乙醇濃縮，濃縮液用超濾截留，即得到小牛血去蛋白提取液。該方法采用低溫離心方式進行分離，對工藝設備要求較高，同時能耗也較大。

專利200710194950.2公開了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括：采幼牛靜脈血，離心得到血清，加熱除蛋白，濾液濃縮后加乙醇進行醇沉，過濾并濃縮濾液，得到醇沉后的濾液，濾液調酸性并加入活性炭脫色，過濾收集濾液，濾液調至堿性，冷凍除蛋白，過濾得到的濾液用纖維膜超濾除高分子物質，反復2～5次，過濾即得到小牛血去蛋白提取物。該方法冷凍除蛋白的條件為-50～0℃，時間為12～72小時，且需反復2～5次，工序較長，能耗較大。

專利200610080520.3公開了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括：采幼牛靜脈血，分離出血清，用乙醇去蛋白，減壓去除乙醇，加入復合蛋白酶水解，離心分離留上清，上清液以截留分子量為5000道爾頓的中空纖維柱超濾，然后分別過葡聚糖G-15凝膠柱、Sephadex-50凝膠柱，特征性收集280nm處有特異吸收的餾分，最后采用微孔濾膜過濾和紫外線滅活。該方法采用葡聚糖G-15凝膠柱、Sephadex-50凝膠柱分離純化，分離效率偏低，產業化存在一定難度。

專利200810094486.4公開了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括：小牛血清用96%乙醇進行醇沉，離心后留上清濃縮后用截留分子量100000D的中空纖維柱粗濾，濾液依次用甲苯、乙酸乙酯、正丁醇萃取，保留水層，水層溶液濃縮后用BIO-GEL-P2凝膠層析分離；即為小牛血清去蛋白提取液。該方法采用有機溶劑萃取和柱層析結合的方式進行分離純化，不僅會導致效率不高，同時甲苯二類溶劑會影響產品的安全性。

專利200710117951.7公開了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括：小牛血清先用紗布粗濾，去除纖維蛋白后，以5000~10000rpm離心1~2min，然后依次用濾紙過濾、0.2μm濾膜精濾、10000~20000分子量的超濾器進行超濾、5000-8000分子量的超濾器進行超濾，將超濾液濃縮后調pH值至6.5~7.5，滅菌后冷凍1~2d，緩化放置3~15d，調pH值至5.5~6.5，再用6000分子量的超濾器進行超濾，經0.2μm濾膜精濾和滅菌。該方法生產周期長，會影響生產效率；滅菌冷凍后緩化3~15天對工作廠地大小和環境有較高要求，將制約生產產能和生產效率。

專利200810148841.1公開了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，包括：小牛血全血依次經過酸沉、冷凍、融化、收集離心后上清液，上清液依次再經過堿沉、冷凍、融化、離心，離心上清液再進行酸沉，上清液依次進行反滲透濃縮、中空纖維柱超濾。該方法需要冷凍至-20℃，再在40℃條件下融化，整個生產周期長，生產效率不高。

專利200910246717.3、200510076914.7制備方法中均加入了枸椽酸鈉，并在低溫保存后收集上清液，上清液加入胃蛋白酶酶解，并過活性碳柱或者殼聚糖改性活性碳柱。該制備方法采用了酶解工藝，容易產生雜質，同時上清液過活性炭柱無法控制產品的無菌。