[發明專利]約氏乳桿菌在提高肉仔雞生產性能中的應用

在審

• 申請號: 201210305033.8
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號: CN102805269A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 張軍;汪攀;孫曉雯;閆軼潔;王安如
• 申請（專利權）人: 鄭州市大北農飼料科技有限公司;北京大北農科技集團股份有限公司
• 主分類號: A23K1/18
• 分類號: A23K1/18;A23K1/16;C12N1/20;C12R1/225
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種約氏乳桿菌菌株CGMCC?No.4926在提高肉仔雞生產性能中的應用。

背景技術

約氏乳桿菌（Lactobacillus?johnsonii）屬于厚壁菌門（Firmicutes）芽孢桿菌綱（Bacilli）乳桿菌目（Lactobacillales）乳桿菌科（Lactobacillaceae）乳桿菌屬（Lactobacillus），1980年首次被分離，然而在分類學上一直將其劃分為嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus）。1992年Fujisawa等通過生化實驗和DNA雜交實驗將其定名為約氏乳桿菌。約氏乳桿菌主要存在于動物和人的消化道中，且為優勢菌群。

歐盟食品安全局（EFSA）會分別于2009年和2011年三次發布了針對約氏乳桿菌的健康申明，申明指出約氏乳桿菌具有減少腸道內病原菌的微生物，增強天然防御和免疫系統和保持皮膚健康。并且歐盟對約氏乳桿菌進行了安全資格認定（qualified?presumption?of?safety,QPS）批準其在飼料和食品中使用。綜合目前關于約氏乳桿菌的文獻報道，其對動物的益生功能主要體現在以下幾方面：1.約氏乳桿菌對動物天然防御系統及免疫機能具有調節作用，其具體調控位點，如TGFβ，TLR9，NF-κB，IgA，往往是動物機體免疫應答反應的起始受體，因此其預防動物疾病的作用機理可能是在特定時期刺激動物免疫系統，早期激活下游免疫應答進而防止疾病發生；2.約氏乳桿菌表現出對動物皮炎的特異性預防作用。3.約氏乳桿菌對病原菌的排他性競爭作用。約氏乳桿菌對一些病原菌如沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌在腸道上皮細胞上的定殖產生空間位阻，可防止病原菌對腸道上皮細胞的侵染，減少疾病發生。

2010年我國衛生部辦公廳將約氏乳桿菌收錄到《可用于食品的菌種名單》中，批準其作為具有益生功能的食品添加劑使用。目前在國內尚未見有將約氏乳桿菌作為添加劑添加食品和飼料添加劑的產品面世，其在動物畜禽養殖上的應用也鮮見報道，將約氏乳桿菌開發成動物微生態飼料添加劑，為填補國內空白，篩選益生性能優良的約氏乳桿菌，對促進我國畜禽養殖水平，保證我國的糧食安全意義重大，可在畜禽養殖中發揮更大作用。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供約氏乳桿菌CGMCC?No.4926在提高肉仔雞生產性能中的應用。

本發明的約氏乳桿菌(Lactobacillus?johnsonii)，是通過體外耐酸和耐膽鹽篩選得到的一株均有潛在益生功能的約氏乳桿菌，命名為約氏乳桿菌(Lactobacillus?johnsonii)YS-12，并于2011年6月8日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心進行了保藏，保藏號為CGMCC?No.4926。

其中，所述的約氏乳桿菌YS-12的篩選過程如下：

（1）收集菌種

截取健康豬結腸后半段，用生理鹽水沖洗三次，用牙簽多次掛取腸道上皮上的附著物，放入10mL的生理鹽水中，作為樣品原液，對原液進行10倍梯度稀釋。

（2）菌種培養

將每個稀釋度，取100微升涂布于MRS平板上，37℃倒置培養24小時。

（3）菌種鑒定

挑取平板上的單菌落進行對其16S?rRNA進行菌落PCR鑒定，通過在數據庫中進行序列比對，發現其16S序列（GenBank登錄號：HQ641209），進一步通過理化實驗證實其為約氏乳桿菌。

（4）菌種篩選

1）將菌體重懸于PBS液后，梯度稀釋至10^-2，用移液器吸取10^-2稀釋液100微升分別加入900微升0.3%的膽鹽溶液和PBS（對照）中，37℃保溫3小時。

2）將菌體重懸于PBS液后，梯度稀釋至10^-2，用移液器吸取10^-2稀釋液100微升分別加入900微升pH3.0的緩沖液和PBS（對照）中，37℃保溫3小時。

3）將酸處理過的菌液繼續稀釋至10^-5，取10^-3、10^-4、10^-5三個稀釋度（對照組稀釋至10^-6，取10^-4、10^-5、10^-6）各0.1ml涂布MRS平板，37℃倒置培養48小時。挑取耐受性菌株進行反復篩選，得到耐酸和耐膽鹽性能優良的約氏乳桿菌。