[發(fā)明專利]一種薄荷節(jié)間莖段高效再生體系的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210301821.X
• 申請日: 2012-08-23
• 公開（公告）號: CN102783419A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李維林;于盱;梁呈元;王海棠;劉艷
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種薄荷節(jié)間莖段高效再生的方法建立

技術(shù)背景

薄荷(Mentha?haplocalyx?Briq.)的莖、葉中富含揮發(fā)油，被廣泛地應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品、香料、煙草等工業(yè)。薄荷全草入藥，用于治療風熱感冒、風溫初起、頭痛、目赤、喉痹、咽喉腫痛、口舌生瘡、牙痛、蕁麻疹、風疹等。薄荷是我國重要的香料和藥用植物之一，在江蘇、安徽、江西等地廣為栽培，已成為當?shù)刂匾霓r(nóng)業(yè)特種經(jīng)濟作物。但是在薄荷生產(chǎn)中出現(xiàn)的品種單一、品種退化現(xiàn)象，使薄荷的育種工作越來越引人注目。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育薄荷優(yōu)良新品種，具有目的基因來源廣，可定向改變目標性狀的優(yōu)點。建立一種高效的組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)并最終將其建立成轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)是獲得轉(zhuǎn)基因育種成功的關(guān)鍵。目前針對國內(nèi)薄荷品種的快速繁殖系統(tǒng)主要以莖尖為再生材料，但該方法莖尖繁殖時間短適合于薄荷品種的大規(guī)模擴繁并不適用于遺傳轉(zhuǎn)化方法的建立。因此，為了便于更好的開展國內(nèi)中藥薄荷品種的遺傳轉(zhuǎn)化研究，必須建立一種完善的的中藥薄荷主栽品種的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是提供一種中藥薄荷品種的高效再生遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。本發(fā)明以國內(nèi)薄荷栽培品種為對象，建立了高再生率、穩(wěn)定、重復性好的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)，為利用基因工程技術(shù)進行遺傳育種奠定基礎(chǔ)。對我國薄荷種質(zhì)資源創(chuàng)新與改良等方面具有積極作用和現(xiàn)實意義

具體內(nèi)容：

1、本發(fā)明提供一種薄荷(Mentha?haplocalyx?Briq.)莖段組織培養(yǎng)快繁新方法，按以下次序的幾個步驟進行：

(1)外植體的采集和無菌體系的建立

3～6月份采集薄荷頂芽，洗衣粉溶液浸泡15min后，流水沖洗30min。接種前用75％(V/V)酒精消毒30s，再用0.2％(m/V)HgCl2溶液浸泡15min，無菌水沖洗3次。吸干表面水份后，剝?nèi)ネ鈱尤~片，切成0.5cm長的莖尖，接種在下列培養(yǎng)基中

在溫度25±3℃，光照度1500～3000lx，光照時間10～12h/d，培養(yǎng)25～45d后繼代于相同培養(yǎng)基上30d后獲得無菌苗材料。

(2)、節(jié)間莖段不定芽誘導培養(yǎng)：在無菌條件下，將無菌材料第2，3，4節(jié)間莖段接種到下列誘導培養(yǎng)基中。

MS基本培養(yǎng)基

在溫度25±3℃，暗培養(yǎng)40～50d，節(jié)間莖段不定芽誘導率可達90％以上。

(3)、不定芽繼代生長培養(yǎng)：將步驟(2)獲得的不定芽剪下，接種到下列培養(yǎng)基中。

MS基本培養(yǎng)液

在溫度25±3℃，光照度1500～3000lx，光照時間10～12h/d，培養(yǎng)30d；

(4)、壯苗培養(yǎng)：為進一步提高移栽成活率的在生根前需進行壯苗培養(yǎng)。將步驟(3)獲得的不定芽轉(zhuǎn)入下列壯苗培養(yǎng)基中。

MS基本培養(yǎng)液

在溫度25±3℃，光照度1000～2000lx，光照時間10～12h/d。培養(yǎng)20～35d。

(5)、生根培養(yǎng)：將步驟(4)獲得株高5.0～8.0cm的無菌苗，轉(zhuǎn)入下列生根培養(yǎng)基中。

1/2MS基本培養(yǎng)基

在溫度25±3℃，光照度1000～2000lx，光照時間10～12h/d。培養(yǎng)15～20d后，生根率可達90％以上，葉色濃綠，生長健壯。

有益效果：

本發(fā)明通過節(jié)間莖段不定芽再生體系的成功構(gòu)建，完成了外植體的選取、誘導分化、壯苗、生根等關(guān)鍵技術(shù)。這種再生體系不定芽誘導率可達95％，高效穩(wěn)定、重復性好，不定芽再生周期短，適用于作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但實施例僅是示例性的，對本發(fā)明不構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解的是在不偏離本發(fā)明精神和范圍的情況下，可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，而這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。

實施例一

薄荷品種‘738’節(jié)間莖段不定芽再生，按以下次序的幾個步驟進行：

1、外植體的采集和無菌體系的建立