[發(fā)明專利]一種薄荷節(jié)間莖段高效再生體系的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210301821.X
• 申請日: 2012-08-23
• 公開（公告）號: CN102783419A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李維林;于盱;梁呈元;王海棠;劉艷
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省中國科學(xué)院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種薄荷節(jié)間莖段高效再生的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)外植體的選取與消毒：取薄荷莖尖作為外植體，沖洗干凈后，進(jìn)行消毒；

(2)節(jié)間莖段不定芽的誘導(dǎo)：取步驟(1)中得到的無菌苗節(jié)間作為外植體，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度25±3℃，暗培養(yǎng)40天；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基并添加激素TDZ、IAA；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中TDZ濃度為2.0-4.0mg·L-1，IAA濃度為0.2-0.5mg·L-1；

(3)不定芽繼代生長：將步驟(2)中誘導(dǎo)出的不定芽剪下接入不定芽繼代生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，所述所述繼代生長培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基并添加激素6-BA和NAA；所述繼代生長培養(yǎng)基中6-BA濃度為0.5-1.0mg·L^-1，NAA濃度為0.1-0.5mg·L^-1；所述正常培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25±3℃，光照時間8-10h，光照強度1500-2000lx；

(4)無菌苗的壯苗培養(yǎng)：將步驟(3)中的到的無菌苗接種于壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-35天，所述所述繼代生長培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基并添加激素6-BA和NAA；所述繼代生長培養(yǎng)基中6-BA濃度為0.5-1.0mg·L^-1，NAA濃度為0.3-0.5mg·L^-1；所述正常培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25±3℃，光照時間8-10h，光照強度1500-2000lx；

(5)生根培養(yǎng)：將步驟(4)獲得的無菌苗接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20天，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基并添加激素6-BA和NAA；所述繼代生長培養(yǎng)基中6-BA濃度為0.1-0.5mg·L^-1，NAA濃度為0.5-1.0mg·L^-1；所述正常培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25±3℃，光照時間8-10h，光照強度1500-2000lx；

上述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基中均含有瓊脂5.5-7.0g/L、蔗糖25-35g/L，且pH值為5.6-5.8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述薄荷節(jié)間莖段不定芽誘導(dǎo)方法，其特征在于：所述步驟(2)中的節(jié)間外植體為(1)步驟所得無菌苗第2，3，4節(jié)節(jié)間莖段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述薄荷節(jié)間莖段不定芽誘導(dǎo)方法，其特征在于：所述步驟(2)中還含有椰汁，所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中椰汁濃度為20％-25％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述薄荷節(jié)間莖段不定芽遇到方法，其特征在于：所訴步驟(2)中的正常培養(yǎng)時間為40天；所述步驟(3)中繼代生長培養(yǎng)時間為30天；所述步驟(4)中的壯苗生長時間為20-35天；所述步驟(5)中生根培養(yǎng)時間為15-20天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述薄荷不節(jié)間莖段不定芽誘導(dǎo)方法，其特征在于：所述步驟(1)中莖尖外植體取材于3～6月份；所述步驟(1)中進(jìn)行消毒的過程為：將外植體用洗衣粉溶液浸泡15分鐘后，流水沖洗20-30min。于無菌操作臺上75％乙醇消毒30秒，再用0.2％HgCl₂溶液浸泡15分鐘，無菌水沖洗3次。

所述節(jié)間莖段材料為無菌苗形態(tài)學(xué)第2，3，4節(jié)間莖段。

所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基。

所述一定濃度的植物激素為TDZ2.0～4.0mg·L^-1和IAA0.2～0.5mg·L^-1。

所述添加劑為20％～25％椰汁。

將誘導(dǎo)40天后分化出的不定芽接種于芽伸長生長培養(yǎng)基上。所述壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+0.5～1.0mg·L^-16-BA+0.3～1.0mg·L^-1NAA+5.5g·L^-1瓊脂+30g·L^-1蔗糖，pH5.5～5.8；培養(yǎng)條件為溫度25℃，光照時間8～10h，光照強度1500～2000lx；培養(yǎng)20d，轉(zhuǎn)接增殖2次；

所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1～0.5mg·L^-16-BA+0.3～1.0mg·L^-1NAA+5.5g·L^-1的瓊脂+30g·L^-1蔗糖，pH5.5～5.8；培養(yǎng)條件為溫度25℃，光照時間8～10h，光照強度1500～2000lx；培養(yǎng)20d。