[發(fā)明專利]一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210299280.1
• 申請(qǐng)日: 2012-08-22
• 公開（公告）號(hào): CN103074245A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李亞峰;王友琦;張雪崢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 駐馬店華中正大有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/49
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，是一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法。

在金霉素發(fā)酵工藝中，現(xiàn)行的金霉素發(fā)酵種子接種過程，是由3-6個(gè)生長良好的孢子瓶制備成孢子液，然后采用壓差法把孢子液接入種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。孢子液制備過程中，需要制備大量的孢子瓶來滿足生產(chǎn)的需要，并且對(duì)大量的孢子瓶的保藏需要多臺(tái)冷藏設(shè)備。

本專利著重研制一種新的接種工藝(搖瓶菌絲進(jìn)罐)，減少孢子的使用量。提高金色鏈霉菌的產(chǎn)抗能力及工作效率。具體為：用1個(gè)生長良好的孢子瓶，采用挖塊法取1cm²左右孢子，接入滅菌后的搖瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)好后，混合均勻分裝到接種瓶中，采用壓差法把菌絲液接入種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。種子罐培養(yǎng)好后移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵。

背景技術(shù)

金霉素(Chlortetracycline)，又稱氯四環(huán)素，屬四環(huán)素類中衍生物的一種。化學(xué)名：6-甲基-4-二甲氨基-3，6，10，12，12a-五羥基-1，11-二氧代-7-氯-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氫-2-并四苯甲酰胺。分子量：478.8；分子式：C₂₂H₂₃ClN₂O₈。金霉素抗菌譜廣，對(duì)陽性菌、陰性菌、螺旋體、立克次氏體、支原體、衣原體、某些原蟲等均可產(chǎn)生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制細(xì)菌的生長，在其較高濃度時(shí)具有殺菌作用，其作用機(jī)制是干擾蛋白質(zhì)的合成。適用于雞白痢、傷寒、豬細(xì)菌性腸炎以及禽類副傷寒、霍亂等疾病。同時(shí)，作為理想的飼料添加劑它還具有預(yù)防潛在感染、改善消化代謝、抑制腸道內(nèi)有害微生物，促進(jìn)有益微生物生長、提高飼料效能等。在全球范圍內(nèi)，金霉素是所有飼料藥物添加劑中使用量最大的品種，是國際上重要的獸用抗生素之一。

在金霉素發(fā)酵工藝中，大型發(fā)酵罐現(xiàn)行的金霉素發(fā)酵種子接種過程，是由3-6個(gè)生長良好的孢子瓶制備成孢子液，每瓶加無菌水約30ml，用刮孢鏟將孢子磨下，將磨好的孢子液倒入已滅菌的空孢瓶內(nèi)，裝上微孔接種針備用。然后采用壓差法把孢子液接入種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。種子罐控制一定的生長時(shí)間，培養(yǎng)好后，再利用壓力差移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵。

但是這種接種方式容易產(chǎn)生一些問題。首先，孢子培養(yǎng)基主要原料為麩皮，麩皮為小麥最外層的表皮，小麥被磨面機(jī)加工后，變成面粉和麩皮兩部分，麩皮就是小麥的外皮，它價(jià)格低廉，富含纖維素和半纖維素，是微生物生長的優(yōu)良碳源，尤其是在鏈霉素的培養(yǎng)基中使用廣泛，對(duì)于促進(jìn)產(chǎn)孢效果顯著。但麩皮的質(zhì)量受產(chǎn)地、品種、氣候、耕種條件、儲(chǔ)藏期限、制備工藝等諸多因素影響，無量化指標(biāo)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行有效控制。麩皮的波動(dòng)直接影響培養(yǎng)的孢子，進(jìn)而影響進(jìn)罐種子質(zhì)量，對(duì)于后續(xù)的發(fā)酵產(chǎn)抗都會(huì)產(chǎn)生關(guān)聯(lián)，這種影響對(duì)于生產(chǎn)過程的控制增加了難度，很多時(shí)候更會(huì)給結(jié)果帶來不利的影響。

其次，同一種子罐使用多只孢子瓶的孢子液，孢子的菌落差異導(dǎo)致種子生長階段存在一定的內(nèi)在差異，統(tǒng)一的種齡控制不能完美地滿足所有的種子。這會(huì)造成發(fā)酵過程起步狀態(tài)的不統(tǒng)一，同樣會(huì)給生產(chǎn)過程控制增加困難，并在一定程度上造成結(jié)果的差異化。

再次，采用此種制種方式，在工廠生產(chǎn)的孢子液制備環(huán)節(jié)中，需要制備大量的孢子瓶來滿足生產(chǎn)的需要，并且對(duì)大量的孢子瓶的保藏需要多臺(tái)冷藏設(shè)備。這無疑都增加了人員、設(shè)備的投入要求，不利于企業(yè)的生產(chǎn)成本控制，也給菌種的保藏管理帶來壓力。因此，我們尋求開發(fā)一種新的接種工藝，以搖瓶菌絲的接種形式代替孢子懸液進(jìn)罐。搖瓶菌絲制備使用的孢子瓶孢子量較少，通過搖瓶培養(yǎng)，將孢子萌發(fā)為菌絲體，其生長階段和質(zhì)量趨一致性，對(duì)種子罐種齡和質(zhì)量控制更便捷、有效，能夠有效提高工業(yè)水平大容量發(fā)酵罐金霉素發(fā)酵的產(chǎn)抗能力及大規(guī)模發(fā)酵工業(yè)的工作效率

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種培養(yǎng)周期短，穩(wěn)定性好，生長成本低的新接種工藝。與傳統(tǒng)工藝比較，新的接種工藝以搖瓶菌絲的接種形式代替孢子懸液接種。搖瓶菌絲制備使用的孢子量較少，通過搖瓶培養(yǎng)，將孢子萌發(fā)為菌絲體，其生長階段和質(zhì)量趨于一致性，對(duì)微生物種子質(zhì)量控制更便捷、有效，能夠提高工業(yè)水平大容量金霉素產(chǎn)生菌的產(chǎn)抗能力及大規(guī)模發(fā)酵工業(yè)的工作效率。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為：

1：本項(xiàng)研究通過接種形式的改變，提高了發(fā)酵種子質(zhì)量的一致性，穩(wěn)定了發(fā)酵過程代謝，使發(fā)酵過程更易于控制；同時(shí)降低了種子制備的勞動(dòng)強(qiáng)度，給工作帶來了顯著的改善。