[發(fā)明專利]一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210299280.1
• 申請(qǐng)日: 2012-08-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103074245A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李亞峰;王友琦;張雪崢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 駐馬店華中正大有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/49
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，包括：(1)孢子培養(yǎng)；(2)搖瓶菌絲；(3)種子培養(yǎng)；(4)深層液體通氣發(fā)酵，其中深層液體通氣發(fā)酵的條件如下：①發(fā)酵培養(yǎng)基組成：花生餅粉或黃豆餅粉：3.0％-5.0％；玉米淀粉：8.0％-12.0％；氯化鈉：0.2％-0.3％；硫酸銨：0.4％-0.6％；碳酸鈣：0.5％-0.8％；酵母粉：0.1％-1.6％；硫酸鎂：0.02％-0.03％；磷酸二氫鉀：0％-0.03％；淀粉酶：0.003％-0.02％；②培養(yǎng)溫度：接種后培養(yǎng)溫度控制在28-34℃，菌絲成熟后降溫至29±3℃培養(yǎng)；③發(fā)酵周期為90-124小時(shí)；④發(fā)酵培養(yǎng)基消后pH控制在5.6-6.5；⑤發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中為固定轉(zhuǎn)速，控制在120-140rpm；⑥溶氧大于30％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，其特征在于：從母瓶上挑取孢子豐滿、無(wú)白點(diǎn)的單菌落4-10只于約1-10ml無(wú)菌水中，攪勻，用玻璃鏟挑取孢子液，接入子瓶斜面培養(yǎng)基上；要求菌落分布均勻，密布整個(gè)培養(yǎng)基表面；接好的斜面標(biāo)識(shí)后，置于溫度32±1℃、濕度40-65％的恒溫室內(nèi)培養(yǎng)3-5天，成熟后置于0-10℃冰箱保藏備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，其特征在于：搖瓶種子培養(yǎng)成熟后，在無(wú)菌條件下，將種子液合并為150mL/瓶的接種瓶?jī)?nèi)，可直接用于種子罐培養(yǎng)，也可將合瓶后的種子液于-20℃冰箱內(nèi)冷凍保藏，保藏期限≤45天。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌的冷凍搖瓶菌絲替代孢子接種的方法，其特征在于：將保藏的搖瓶菌絲室溫下解凍，接入種子罐內(nèi)培養(yǎng)；種子罐培養(yǎng)溫度控制在26-33℃，罐壓控制在0.04-0.06Mpa條件下進(jìn)行培養(yǎng)，從消后到培養(yǎng)過(guò)程中，取樣做無(wú)試檢查與生化參數(shù)(pH值、總糖、氨基氮、效價(jià)等)檢驗(yàn)，培養(yǎng)時(shí)間19-25小時(shí)，二級(jí)種子液培養(yǎng)時(shí)間4-8小時(shí)，種子生長(zhǎng)良好可移入發(fā)酵罐。