[發明專利]乙醇酸的酶促生產

有效

• 申請號: 201210290815.9
• 申請日: 2005-12-21
• 公開（公告）號: CN102796769A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: R.迪科西莫;M.S.佩恩;A.帕諾瓦;D.P.奧基夫;J.S.湯普森
• 申請（專利權）人: 納幕爾杜邦公司
• 主分類號: C12P7/42
• 分類號: C12P7/42;C12R1/19
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;萬雪松

1.一種由乙醇腈生產乙醇酸的方法，包括：

a)將適合的含水反應混合物中的乙醇腈與包含具有腈水解酶活性的多肽的酶催化劑接觸，由此產生乙醇酸，所述多肽如SEQ?ID?NO:?18所示；和

b)以鹽或酸的形式回收(a)中產生的乙醇酸；其中當在相同的反應條件下將乙醇腈轉化為乙醇酸時，相對于敏捷食酸菌72W腈水解酶的腈水解酶活性，所述酶催化劑提供了至少1.5倍腈水解酶活性增加。

2.權利要求1的方法，其中酶催化劑是當在相同的反應條件下將乙醇腈轉化為乙醇酸時，相對于敏捷食酸菌72W(ATCC?55746)腈水解酶的活性提供了至少約2倍腈水解酶活性改善的改良的腈水解酶催化劑。

3.權利要求1的方法，其中酶催化劑是當在相同的反應條件下將乙醇腈轉化為乙醇酸時，相對于敏捷食酸菌72W(ATCC?55746)腈水解酶的活性提供了至少約4倍腈水解酶活性改善的改良的腈水解酶催化劑。

4.權利要求1的方法，其中酶催化劑以完整的微生物細胞、透化處理的微生物細胞、微生物細胞提取物的一種或多種成分、部分純化的酶或純化的酶的形式存在。

5.權利要求4的方法，其中所述完整的微生物細胞是重組表達所述多肽的轉化的微生物宿主細胞。

6.權利要求4的方法，其中轉化的微生物宿主細胞選自：叢毛單胞菌、棒狀桿菌、短桿菌、紅球菌、固氮菌、檸檬酸桿菌、腸桿菌、梭狀芽孢桿菌、克雷白氏桿菌、沙門氏菌、乳酸桿菌、曲霉、糖酵母、接合酵母、畢赤酵母、克魯維酵母、假絲酵母、漢森氏酵母、杜氏藻、德巴利氏酵母、毛霉菌、球擬酵母、甲基桿菌、芽孢桿菌、埃希氏桿菌、假單胞菌、根瘤菌和鏈霉菌。

7.權利要求6的方法，其中轉化的微生物宿主細胞是大腸桿菌。

8.權利要求7的方法，其中轉化的微生物宿主細胞是選自大腸桿菌MG1655和大腸桿菌FM5的大腸桿菌菌株。

9.權利要求1-8任一項的方法，其中酶催化劑固定在可溶性或不溶性的支持物中或支持物上。

10.權利要求1的方法，其中在含水反應混合物中產生的乙醇酸銨的濃度為約0.02?wt?%至約90?wt?%。

11.權利要求10的方法，其中在含水反應混合物中產生的乙醇酸銨的濃度為約0.02?wt?%至約40?wt?%。

12.權利要求9的方法，其中含水反應混合物中乙醇腈的濃度為約5?mM至約1?M。

13.權利要求12的方法，其中通過連續或等分物添加保持含水反應混合物中的乙醇腈濃度。

14.權利要求1的方法，其中含水反應混合物中pH保持在約5.5至約7.7。

15.權利要求1的方法，其中在基本上無氧的條件下進行乙醇腈酶促轉化為乙醇酸。

16.權利要求1的方法，其中含水反應混合物進一步包含小于5?wt?%濃度的選自硫代硫酸鉀和連二亞硫酸鈉的穩定劑。

17.權利要求1的方法，其中酶催化劑是再循環的酶催化劑。

18.權利要求1的方法，其中酶催化劑提供了每克酶催化劑細胞干重產生至少300克乙醇酸的催化劑生產率。

19.權利要求18的方法，其中酶催化劑提供了每克酶催化劑細胞干重產生至少450克乙醇酸的催化劑生產率。

20.權利要求19的方法，其中酶催化劑提供了每克酶催化劑細胞干重產生至少1000克乙醇酸的催化劑生產率。