[發明專利]靈芝三萜提取方法

無效

• 申請號: 201210288800.9
• 申請日: 2012-08-15
• 公開（公告）號: CN102772448A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 賈利忠
• 申請（專利權）人: 蘇州菩蕓生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/074
• 分類號: A61K36/074;A61P35/00;A61P1/16;A61P3/10;A61P3/06;A61P37/04;A61P17/16;A61P29/00;A61P25/20;A61P39/06
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 高之波;鄔玥

技術領域

本發明涉及一種以靈芝為原料提取成分方法，特別涉及靈芝三萜提取的方法。

背景技術

三萜類化合物是靈芝的主要化學和藥效成分之一。靈芝中所含三萜類化合物具有特別顯著的生理活性。隨著現代科學對靈芝研究的深入，至目前為止，總共分離到350余種化學成分，其中不少化學成分在抗腫瘤、保肝、降血糖、降血脂、增強單核吞噬細胞系與NK細胞功能、增強體液免疫功能、抗放射、鎮痛、鎮靜、抗衰老等方面顯示出了較強的活性。

目前，一般采用有機溶劑法提取靈芝三萜，通常需要較長的提取時間并消耗大量的提取溶劑，同時大量有機溶劑的使用會給人體和環境帶來不利的影響。另外由于靈芝子實體由纖維素、半纖維素和木質素等主要成分構成，結構緊密，傳統的浸提法時間長、耗能高，活性成分提取物得率低。

發明內容

本發明的目的是提供一種新型的靈芝三萜的提取工藝，降低資源消耗、減少生產成本和不必要的設備投入，且有利于環保。

本發明的一種實施方式，提供一種靈芝三萜的提取方法，包括：

1)獲取靈芝干粉，向靈芝干粉中加入復合酶溶液，在35～60℃下復合酶作用酶解1～4h，酶解結束后加熱滅活復合酶；

2)將加熱滅活后的靈芝干粉按如下條件進行提取二次：加入乙醇，使乙醇濃度達40％～80％，調pH值為9～10，進行頻率為20～100KHz的超聲處理控溫30℃～90℃提取2～4h后分離提取液；

3)將步驟2)二次提取得到的提取液調節pH為2～5，進行吸附和洗脫，洗脫液除醇濃縮至原體積的5～20％得濃縮液，加濃縮液3～4倍體積的水攪拌均勻后靜置沉淀，由沉淀物得到靈芝三萜提取物。

步驟1)中復合酶為木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶中任意兩種或三種混合物。木瓜蛋白酶用量為每克靈芝干粉4800～800000U、纖維素酶用量為每克靈芝干粉90～1500U，果膠酶用量為每克靈芝干粉32～200U。復合酶溶液用量為每克靈芝干粉加入3mL。

步驟3)中樹脂為大孔非極性吸附樹脂。

步驟2)中使用氫氧化鈉飽和溶液調節pH值。

步驟3)中使用1mol/L的HCl溶液調節pH值。

步驟3)使用35％～75％乙醇洗脫。

本發明的內容涉及復合酶酶解、超聲波堿醇提取、大孔吸附樹脂吸附等集成技術從靈芝子實體中高效提取靈芝三萜的方法。

本發明方法所用溶劑安全、低毒，避免了傳統方法中采用氯仿、甲醇等有機溶劑對環境的污染。與超臨界二氧化碳萃取法相比，具有提取設備簡單、操作方便、成本低、速度快、收效高等特點。采用超聲波輔助提取靈芝三萜并通過樹脂吸附，相對于傳統的有機溶劑法，可使靈芝三萜提取率顯著提高，采用生物酶酶解原料后再提取相對于傳統的熱水浸提法，可使靈芝三萜的提取率和提取量得到較大提高，且易除去雜質、最大限度地保持三萜活性等優點。

具體實施方式

下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法，使用到的酶與吸附樹脂為市售商業產品，下面對發明作進一步詳細的說明。

實施例1：

(1)取50.0g粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復合酶(0.6g木瓜蛋白酶，比活力為800000U/g；和1.2g纖維素酶，比活力為15000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在35℃下對原料進行酶解4h，酶解結束后，升溫至100℃滅酶0.5h。

(2)向釜中加入95％的乙醇和水，至提取液體積達到500ml，乙醇濃度達到40％，再加入氫氧化鈉飽和溶液調pH為9后，加熱至40℃，保溫提取2h，期間使用50KHz的超聲波超聲10min，一釜原料提取2次。

(3)將以上分離所得堿醇提取液減壓旋蒸除醇，用1mol/L的鹽酸溶液調pH為5后將料液倒入HPD700型大孔吸附樹脂，進行吸附。

(4)吸附完畢并水洗至無色后，用35％的乙醇進行解吸至無色為止，并將所得解吸液進行旋蒸濃縮除醇，將解析液濃縮至原體積的1/20后，加入濃縮液4倍量的水，攪拌均勻后靜置沉淀12h，將沉淀1000rpm離心除水。

(5)將所得沉淀烘干并粉碎得靈芝三萜，得率為2.56％，含量為34.5％。

實施例2：