[發明專利]一種卡特蘭組織培養的方法

無效

• 申請號: 201210287484.3
• 申請日: 2012-08-14
• 公開（公告）號: CN102835311A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 邵和平;張瓊;張寧寧;孫永平;夏明霞
• 申請（專利權）人: 江蘇丘陵地區南京農業科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

一、技術領域

本發明涉及一種卡特蘭的組織培養快速繁殖方法，屬于植物細胞工程技術領域。

二、背景技術

卡特蘭是世界上栽培最多，最受人們喜愛的洋蘭之一。它花型優美，色彩艷麗，并且有特殊的芳香。一年四季都有不同的品種開花。花期較長，一般可開放2～3周，不僅是珍貴的盆花，還是重要的高檔切花。組織培養技術的應用大大促進了卡特蘭的規模生產，不僅能加快新品種推廣，而且能夠獲得可觀的經濟效益。但是卡特蘭外植體在初始培養中易褐化死亡，是原球莖誘導成功的一大障礙。目前認為植物組織培養中的褐變主要是由酶促褐變引起，即培養材料變褐主要是由傷口處分泌的酚類化合物引起。選擇適當的外植體是克服褐變的最主要的手段，取材時應注意選擇分生能力較強的外植體。成年植株比幼苗褐變程度嚴重，夏季材料比冬季、早春及秋季材料的褐變嚴重，冬季培養物的存活率明顯高于夏秋季節。因此，采芽時機應盡可能避開生長旺盛期。對外植體要充分漂洗，促進酚類物質滲出。培養基的成分與褐變程度有關，要考慮所選培養基的狀態和類型，篩選適宜的培養基配方。在組織培養過程中，經常進行細胞篩選，可以剔除易褐變的細胞。在外植體接種1~2天后立即轉移到新鮮培養基中，能減輕酚類物質對培養物的毒害作用，使外植體盡快分生，連續轉移5~6次，可基本解決外植體的褐變問題。

現有技術方案：切取優良母株的新梢進行莖尖誘導繁育。通過研究，篩選出適合卡特蘭莖尖培養及分生苗生長的培養基配方和組培快繁技術。新梢經消毒后，于無菌條件下將外包嫩葉剝至1~2?片，小心切除芽基部，保留生長點內長約2~3cm的莖尖頂端分生組織塊，接入莖尖培養基內培養，每瓶放1塊。將接種后的培養基置于室溫(25?±2)℃、相對濕度70%~90%、光照強度2000lx條件下誘導培養，經繼代培養和生根培養，長成合格分生苗。莖尖誘導培養以配方A.?1/2?MS?+?BA?2?mg/L?+?NAA?0.2?mg/L?+?椰乳200?ml/L?+?3?%蔗糖和配方B.?1/2?MS?+?BA?2mg/L?+?NAA?0.2?mg/L?+?3%?蔗糖效果較好，表現為莖尖組織塊分生率較高，誘導培養40天后外植體基部分生出較多的愈傷組織和不定芽點，經繼代培養，不定芽點逐漸發育長成不定芽，切取的不定芽塊轉入生根培養，60?天后長成根莖葉齊全、生長正常的分生瓶苗，可出瓶移栽。?

現有技術從莖尖誘導不定芽到分生苗的培養周期較長，可能與卡特蘭內源激素的作用和植物體生長發育周期較長有關。莖尖培養極易發生褐變，導致外植體切口組織壞死。需通過以下幾個方面的工作減輕外植體的褐變發生：首先，要避免在高溫季節采芽，因為高溫有利植物體內酚類物質的產生，培養時褐變嚴重，新芽成活率較低，春秋季是較適宜的采芽季節；其次，需在培養基內單獨或混合加入活性炭1g/L、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)5g/L、檸檬酸2g/L?等藥劑抑制褐變；再次，培養溫度要保持在20～25?℃，此時培養材料分泌產生的酚類物質較少，室溫超過30℃時，褐變物質顯著增加，成活率大大降低；此外，暗培養和勤轉瓶(15～20?天轉1?次)?也能減輕褐化物質對外植體的危害。?

三、發明內容

技術問題

本發明通過切取卡特蘭新梢的頂芽和不同部位的側芽生長點進行液體培養，詳細描述了莖尖外植體的切割方法，一個新梢可以切取5個外植體，提高了增殖系數。其次通過適宜的激素配比和液體培養技術，有效解決卡特蘭莖尖常規培養方法的外植體褐變現象，提高培養質量。因為酶促褐變如同一般的酶促反應，其發生必須具備三個條件，即酶、底物和氧。液體培養阻斷了外植體與氧氣的接觸，可有效抑制褐變現象，從而簡化卡特蘭的莖尖培養流程。

技術方案

利用卡特蘭新梢頂芽和側芽分生組織為外植體，通過添加適宜的激素配比和液體培養條件，進行愈傷組織誘導和分化，促進愈傷組織增殖并分化出原球莖，切割原球莖進行繼代培養，培養出幼苗，經生根培養長成合格的瓶苗。

具體步驟如下：?

（1）?外植體的選擇與滅菌

選6~8厘米長的新梢作外植體，用升汞消毒法進行消毒，分別取新梢上頂芽和側芽作外植體進行培養，切割頂芽和側芽生長點中心部位的分生組織大小為直徑2~4mm。

（2）愈傷組織誘導培養?