[發明專利]一種提高辣椒疫霉卵孢子產量及促進卵孢子萌發的方法

有效

• 申請號: 201210284431.6
• 申請日: 2012-08-06
• 公開（公告）號: CN102807957A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 劉西莉;畢揚;崔曉嵐;王茜;李健強;陳磊;盧曉紅
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種提高辣椒疫霉卵孢子產量及促進卵孢子萌發的方法。

背景技術

由辣椒疫霉引起的辣椒疫病以及番茄和南瓜等茄科和葫蘆科作物上的疫病目前在亞洲、美洲、歐洲和澳洲普遍發生，在我國大部分省市也都有發生。由于辣椒疫病蔓延迅速，對寄主植物破壞性強，從苗期到結果期都可發病，嚴重危害了植株莖稈、葉片及果實并最終導致死苗和爛果乃至絕收，加之對于此類病害缺少抗病品種以及有效的農業栽培管理措施等原因，導致其危害逐漸加重并難以控制，目前已成為我國蔬菜生產中的重要病害。

辣椒疫霉屬于異宗配合病原卵菌，存在A₁、A₂兩種交配型，在田間可發生有性生殖產生卵孢子。辣椒疫霉的卵孢子是由有性世代產生的具有厚壁的一種休眠有性孢子，在自然界中可以抵抗不良環境，是辣椒疫霉越冬的主要方式。自然條件下，辣椒疫霉卵孢子形成后通常需要經過一段時間的休眠才能陸續萌發，但是在室內條件下，一些野生型菌株或誘導獲得的突變體菌株卵孢子產生量少、萌發率低，給疫霉菌遺傳學等相關研究帶來了困難。遺傳分析研究要求辣椒疫霉在室內培養條件下可以快速產生大量卵孢子，并能夠同時萌發，以縮短試驗周期并保障研究結果的準確性。

對于疫霉卵孢子產生以及萌發的研究也有相關報道，但是同屬不同種的疫霉菌株其卵孢子產生及萌發所需條件不同，且目前主要集中于對致病疫霉、苧麻疫霉、大豆疫霉、惡疫霉等卵孢子的產生以及萌發條件的研究，關于辣椒疫霉卵孢子的研究國內未見報道。建立一種簡易、高效的誘導辣椒疫霉卵孢子大量產生及萌發的方法，是本領域亟待解決的一個技術問題，也為辣椒疫霉遺傳學相關研究奠定了基礎。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種提高辣椒疫霉卵孢子產量的方法。

本發明所提供的提高辣椒疫霉卵孢子產量的方法，包括如下步驟：用10%V₈蔬菜汁培養基培養辣椒疫霉菌株，培養條件為黑暗。

上述過程中，所述培養的時間為15天-60天，具體為45天-60天；所述培養的溫度為25℃-28℃，具體為25℃。

本發明的另一個目的是提供一種促進辣椒疫霉卵孢子萌發的方法。

本發明所提供的促進辣椒疫霉卵孢子萌發的方法，包括如下步驟：

（1）將辣椒疫霉卵孢子在黑暗條件下培養15-45天；

（2）用質量百分含量為0.05%—0.25%的高錳酸鉀處理步驟（1）所得卵孢子；

（3）將步驟（2）所得卵孢子在16h日光燈/8h黑光燈交替照射的條件下培養。

上述過程中，所述步驟（1）中，培養的時間為15天、30天或45天；

所述步驟（2）中，所述高錳酸鉀的質量百分含量為0.1%—0.25%。

上述過程中，所述步驟（2）中，所述高錳酸鉀的質量百分含量為0.1%或0.25%；

上述過程中，所述步驟（2）中，所述處理的方法為：將所述卵孢子制成懸浮液，向懸浮液中加入高錳酸鉀，超聲處理20-40s。

上述過程中，超聲處理的時間具體為30s，超聲的功率為250W，工作頻率為40KHz。

上述過程中，所述步驟（3）中，培養的時間為5天。

上述過程中，所述步驟（3）中，所述培養中使用的培養基是S+L培養基。具體制備方法為：卵磷脂0.1g，基礎培養液10ml[MgSO₄·7H₂O?100mg，(NH₄)SO₄?100mg，K₂HPO₄?60mg，CaCl₂·2H₂O?30mg，KH₂PO₄?30mg，ZnSO₄·7H₂O?3mg，蒸餾水100ml]，葡萄糖0.04g，瓊脂粉14g，蒸餾水定容至1L。

上述過程中，步驟1）中，培養所用的培養基為10%V₈蔬菜汁培養基。

上述過程中，所述步驟（1）和步驟（3）中，溫度為25℃-28℃，具體為25℃。

上述過程中，在所述步驟（1）之前，包括如下步驟：用權利要求1或2所述方法制備辣椒疫霉卵孢子。