[發(fā)明專利]一種多溴聯(lián)苯同系物免疫原及其制備方法

無效

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• 申請日: 2012-08-08
• 公開（公告）號: CN102898515A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊惠生;陳寒玉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765
• 代理公司: 上海科盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 林君如

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種免疫原及其制備方法，尤其是涉及一種多溴聯(lián)苯同系物免疫原及其制備方法。

背景技術(shù)

溴系阻燃劑是目前世界上產(chǎn)量最大的有機(jī)阻燃劑之一，其中主要是多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)和多溴聯(lián)苯(PBBs)類物質(zhì)，常作為阻燃添劑加入樹脂、聚苯乙烯和聚氨酯泡沫等高分子合成材料中，廣泛地應(yīng)用于塑料制品、紡織品、電路板和建筑材料等領(lǐng)域，并隨著這些產(chǎn)品的使用，慢慢逸散到環(huán)境中。

多溴聯(lián)苯和多氯聯(lián)苯化學(xué)性質(zhì)類似，是一種在環(huán)境中非常穩(wěn)定而且容易形成生物積累的化學(xué)品，關(guān)于多溴聯(lián)苯的生物毒性的認(rèn)識這幾年也有很大發(fā)展。由PBBs和PBDEs蓄積作用而造成的環(huán)境、食品污染問題已引起歐盟、美國等發(fā)達(dá)國家高度關(guān)注，歐盟電子電器設(shè)備中有害物質(zhì)的限制指令(ROHS)指令所涉及的有害物質(zhì)包括阻燃劑(Flame?Retardants)-多溴聯(lián)苯(PBBs)和多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)。目前環(huán)保組織關(guān)于PBDE和PBBs的研究主要集中在水體、土壤、大氣等環(huán)境領(lǐng)域和生物體的毒性方面，樣品的前處理過程、凈化過程和分析過程都存在較大的差異。因此，開展研究并建立有效、可靠的含溴阻燃劑的檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過相關(guān)的法規(guī)予以保障，成為一項(xiàng)極為重要和迫切的工作。

免疫分析是基于抗原抗體特異性識別和結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。免疫分析具有特異性強(qiáng)、靈敏度高(檢測限可達(dá)10^-6～10^-9g)、方便快捷、分析容量大、分析成本低、安全可靠等優(yōu)點(diǎn)。一般不需要貴重儀器，可大大簡化甚至省去前處理過程，對使用人員的專門技術(shù)要求不高，容易普及和推廣。

對于多溴聯(lián)苯的免疫監(jiān)測方法的建立，國內(nèi)迄今為止還沒有見到相關(guān)的報(bào)道。這可能由于多溴聯(lián)苯同系物的種類繁多，而且，PBBs同系物的物理、化學(xué)、生物和毒物學(xué)的性質(zhì)不同。因此有關(guān)前沿研究要求PBBs的分析必須由測定總量的水平提高到測定同類物和異構(gòu)體的水平上來，因此單個PBBs同系物的定性和定量分析是十分必要的。

因此，多溴聯(lián)苯同系物及其衍生物的制備對其毒理學(xué)性質(zhì)，遷移轉(zhuǎn)化，生態(tài)效應(yīng)等研究具有重要意義。多溴聯(lián)苯半抗原以及免疫原的制備是采用免疫方法測定多溴聯(lián)苯的基礎(chǔ)，對于建立多溴聯(lián)苯單體的監(jiān)測方法，具有重要的應(yīng)用價(jià)值和理論研究意義。

當(dāng)前市場上銷售的多溴聯(lián)苯單體不多，更沒有見到有關(guān)能和大分子蛋白質(zhì)形成免疫原的多溴聯(lián)苯半抗原衍生物分子，因此，關(guān)于多溴聯(lián)苯類環(huán)境污染物的免疫檢測方法的研究至今還未見報(bào)道。對于多溴聯(lián)苯免疫監(jiān)測方法的建立，高純度合適的半抗原是制備具有高靈敏度和特異性免疫原和高效價(jià)抗體的根本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種步驟簡單，速度快，產(chǎn)率高的多溴聯(lián)苯同系物免疫原及其制備方法。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種多溴聯(lián)苯同系物免疫原，該免疫原的結(jié)構(gòu)式如下：

其結(jié)構(gòu)和純度可以通過元素分析，核磁共振，紫外光譜等檢測手段分析鑒定。

一種多溴聯(lián)苯同系物免疫原的制備方法，包括以下步驟：

(1)PBB28半抗原4-(4，4′-二溴聯(lián)苯基)-4氧-丁酸的合成：

制備路線如下：

將丁二酸酐、4，4’-二溴聯(lián)苯溶解于非質(zhì)子性溶劑中，冰浴攪拌，無水三氯化鋁在冰水浴條件下投料，在1-2h內(nèi)分次加入，無水三氯化鋁滴加完畢后撤去冰水浴，在常溫條件下，隔水密封攪拌10-14h，薄層法監(jiān)測反應(yīng)原料點(diǎn)消失后，加稀鹽酸終止反應(yīng)。有機(jī)層用稀鹽酸水洗并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，得黃色固體粉末粗品，經(jīng)過重結(jié)晶，干燥，得到PBB28半抗原4-(4，4′-二溴聯(lián)苯基)-4氧-丁酸；

(2)PBB28人工免疫原PBB28-BSA的制備：

制備路線如下：

在0-5℃的條件下，將溶有N-羥基琥珀酰亞胺和N，N′-二環(huán)己基碳酰亞胺的有機(jī)溶液逐滴加入溶有PBB28半抗原的有機(jī)溶液中，攪拌反應(yīng)6-12h，4℃過夜，將離心分出的上層活化酯加入到pH為6.8-7.4，溶有牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖溶液中，0-4℃的冰浴中反應(yīng)4-6h，離心得到上清液，將上清液轉(zhuǎn)移到半透膜中，在pH為6.8-7.4的磷酸鹽緩沖溶液或0.9％生理鹽水透析5天，即得PBB28人工免疫原(PBB-BSA偶聯(lián)物)，經(jīng)柱提純，加入等量甘油-20℃下或者凍干保存。

步驟(1)中所述的非質(zhì)子性有機(jī)溶劑為二氯甲烷或硝基苯。