[發明專利]一種兔瘟組織滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201210273725.9
• 申請日: 2012-07-31
• 公開（公告）號: CN102755644A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 吳紅云;王衛芳;孫芳
• 申請（專利權）人: 鄭州后羿制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/39;A61P31/14;C12N7/02;C12N7/06
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種兔瘟組織滅活疫苗，其特征在于：包含有兔瘟組織病毒液和蜂膠佐劑，加入比例為：每毫升病毒提取液中含有5—15mg蜂膠。

2.根據權利要求1所述的兔瘟組織滅活疫苗，其特征在于：所述的兔瘟組織病毒液來源于發病兔瘟肝臟組織，取適量按1：5（v/v）加入無菌生理鹽水研磨處理離心后取上清液保存。

3.根據權利要求1所述的兔瘟組織滅活疫苗，其特征在于：所述的蜂膠佐劑可以采用如下方法制備：市場直接購買的蜂膠在-4℃進性冷凍處理6h，冷凍后的蜂膠用粉碎機粉碎，過20目篩，用950g/L酒精純化，并配成30mg/ml的蜂膠溶液。

4.一種如權利要求1所述兔瘟組織滅活疫苗的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：（1）兔瘟組織病毒液獲得；（2）成品疫苗配置：取合格蜂膠研磨，用950g/L酒精純化，并配成30mg/ml的溶液，得到制苗用蜂膠佐劑；（3）取步驟（1）所得的滅活病毒液與蜂膠佐劑，用膠體磨乳化，加入10mg/l硫柳汞，使其最終濃度達0.01%，混合均勻，定量分裝。

5.根據權利要求4所述的兔瘟組織滅活疫苗的制備方法，其特征在于：所述的兔瘟組織病毒液獲得具體包括以下步驟：

（1）病料來源及處理剖檢有典型兔瘟癥狀的病死兔，無菌取肝臟組織研磨后按照1：5加入無菌生理鹽水，再加上青鏈霉素1000U（ug）/ml,放置4℃過夜，反復凍融3次4000rpm/min離心5分鐘，取上清于4℃12000rpm/min20分鐘離心純化后，無菌取其上清液保存備用；

（2）兔體傳代培養取上述備用組織上清液以1ml/只注射小鼠，共5只，每傳一代均取死亡兔肝臟保存于-15℃低溫下，作為傳代材料；

（3）病毒液獲取將收集肝臟取少許按1：5加入無菌生理鹽水，研細，1500rpm/min離心10分鐘，取上清，做無菌試驗和凝集人O型紅細胞實驗，無菌條件下，將剩余肝臟除去脂肪和結締組織，剪碎后用搗碎機反復搗碎3000rpm/min，5min，六層紗布過濾，收集濾液，用pH為7.2的PBS液10倍稀釋；

（4）毒液滅活在步驟(3)的PBS稀釋液中加入試劑純福爾馬林液，使其最終含量為0.4%，充分搖勻，用玻塞蓋口再用溶蠟密封。置于37℃環境中作用48小時，每2小時振搖一次，使其充分滅活，制成滅活疫苗，低溫保存。

6.根據權利要求5所述的兔瘟組織滅活疫苗的制備方法，其特征在于：用無菌生理鹽水稀釋研磨后的組織懸液用4000rpm/min離心5分鐘，取上清于4℃10000rpm/min30分鐘離心純化后，無菌取其上清液保存備用。

7.根據權利要求5所述的兔瘟組織滅活疫苗的制備方法，其特征在于：處理的肝臟病料進行了傳代培養，取上述備用組織上清液以1ml/只注射小鼠，共5只，每傳一代均取死亡兔肝臟保存于-15℃低溫下，作為傳代材料；共傳四代，用兔20只，發病19只，接種后三天內死亡17只，收集病死兔肝臟低溫保存；證實無菌且血凝試驗陽性時判為合格。

8.根據權利要求5所述的兔瘟組織滅活疫苗的制備方法，其特征在于：低溫保存為-15℃，血凝試驗凝集對象為人O型1%紅細胞，陽性效價HA為2⁷。

9.根據權利要求7所述的兔瘟組織滅活疫苗的制備方法，其特征在于：陽性冰凍保存液用甲醛滅活，最終含量為0.4%，充分搖勻，用玻塞蓋口再用溶蠟密封，置于37℃環境中作用48小時，每2小時振搖一次，使其充分滅活。