[發明專利]包括基于金黃色葡萄球菌A蛋白的新配體的層析基質

有效

• 申請號: 201210273398.7
• 申請日: 2012-06-08
• 公開（公告）號: CN102895960A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: S·斯佩克特;R·史密斯;J·奧蘭多;N·比安
• 申請（專利權）人: EMD密理博公司
• 主分類號: B01J20/281
• 分類號: B01J20/281;B01D15/26;G01N30/00;G01N33/566
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路;林曉紅

1.包含一個或多個葡萄球菌A蛋白(SpA)C結構域的親和層析配體，其中至少一個C結構域包含從N末端第1位或第2位起始的至少3個連續氨基酸的缺失。

2.包含一個或多個葡萄球菌A蛋白(SpA)B結構域的親和層析配體，其中至少一個B結構域包含從N末端第1位或第2位起始的至少3個連續氨基酸的缺失。

3.包含一個或多個葡萄球菌A蛋白(SpA)Z結構域的親和層析配體，其中至少一個Z結構域包含從N末端第1位或第2位起始的至少3個連續氨基酸的缺失。

4.權利要求1、2或3的親和層析配體，其中所述配體經0.5M?NaOH處理至少5小時后相對于野生型對應物顯示出降低的片段化。

5.包含連接到固相支持物的權利要求1、2或3的親和層析配體的親和層析基質。

6.權利要求5的親和層析基質，其中所述配體連接到固相支持物時，經0.5M?NaOH處理5小時后相對于野生型對應物顯示出降低的片段化。

7.權利要求1、2或3的親和層析配體，其中所述配體的一個或多個結構域進一步包含第29位氨基酸的突變以減少Fab的結合。

8.權利要求7的親和層析配體，其中所述氨基酸突變包含將甘氨酸殘基或丙氨酸殘基替換為賴氨酸殘基。

9.權利要求5的親和層析基質，其中親和層析配體通過多點連接方式連接到所述固相支持物。

10.權利要求1的親和層析配體，其中所述親和層析配體包含2、3、4、5、6、7或更多個葡萄球菌A蛋白(SpA)C結構域，其中至少一個C結構域包含從第1位或第2位起始的N末端3個連續氨基酸的缺失或N末端4個連續氨基酸的缺失或N末端5個連續氨基酸的缺失。

11.權利要求3的親和層析配體，其中所述親和層析配體包含2、3、4、5、6、7或更多個葡萄球菌A蛋白(SpA)Z結構域，其中至少一個Z結構域包含從第1位或第2位起始的N末端3個連續氨基酸的缺失或N末端4個連續氨基酸的缺失或N末端5個連續氨基酸的缺失。

12.權利要求2的親和層析配體，其中所述親和層析配體包含2、3、4、5、6、7或更多個葡萄球菌A蛋白(SpA)B結構域，其中至少一個B結構域包含從第1位或第2位起始的N末端3個連續氨基酸的缺失或N末端4個連續氨基酸的缺失或N末端5個連續氨基酸的缺失。

13.從樣品中親和純化一種或多種靶分子的方法，所述方法包括步驟：

(a)提供包含一種或多種靶分子的樣品；

(b)在使所述一種或多種靶分子結合到所述基質上的條件下將所述樣品與權利要求5所述基質接觸；和

(c)通過洗脫回收所述一種或多種結合的靶分子。

14.權利要求5的親和層析基質，其中所述基質經0.5M?NaOH處理5小時后保留了初始結合能力的至少95％。

15.權利要求5的親和層析基質，其中所述基質經0.1M?NaOH處理25小時后保留了初始結合能力的至少95％。

16.包含如下結構的親和配體：

[(X)_n，(Y)_m]_n+m，

其中X代表SpA蛋白B結構域、Z結構域或C結構域，

n代表從零至(m-1)范圍的結構域數目，

Y代表N末端缺失至少3個連續氨基酸的SpA蛋白B結構域、Z結構域或C結構域，

m代表范圍是1-8的Y結構域數目，所述配體通過多點連接方式連接到固相支持物。

17.包含兩個或更多個SpA蛋白B結構域或兩個或更多個SpA蛋白C結構域或兩個或更多個SpA蛋白Z結構域或B，Z或C結構域按照任意順序的任意組合的親和層析配體，其中至少一個B，C或Z結構域包含從N末端第1位或第2位起始的至少3個連續氨基酸的缺失。

18.權利要求17的親和層析配體，其中所述配體經0.5M?NaOH處理5小時后，相對于無任何缺失的配體顯示出降低的片段化。