[發(fā)明專利]檢測維生素B12的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210273343.6
• 申請日: 2012-08-02
• 公開（公告）號: CN103575914A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 萬宇平;吳鵬;羅曉琴;馮靜;楊秀賢;韓雪倩;顧蓉蓉;蒲小容
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/82
• 分類號: G01N33/82;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測維生素B12的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于包括有：

（1）包被有維生素B12偶聯(lián)抗原的酶標板；

（2）維生素B12特異性抗體；

（3）酶標記抗抗體；

（4）維生素B12標準品溶液；

（5）底物顯色液；

（6）終止液；

（7）濃縮洗滌液；

（8）復溶液。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述維生素B12偶聯(lián)抗原是由維生素B12半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述維生素B12半抗原結構如下：

。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述維生素B12半抗原的制備方法主要包括如下步驟：

0.50g維生素B12、0.10g琥珀酸酐和1ml吡啶在20ml?DMSO中的混合液，在80℃下攪拌反應40小時，蒸除溶劑，乙醇-水體系多次重結晶后得到鄰苯二甲酸單維生素B12酯。

4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的維生素B12特異性抗體為維生素B12單克隆抗體。

5.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述酶標記抗抗體的標記酶為辣根過氧化物酶；酶標記抗抗體是采用過碘酸鈉法將標記酶與抗抗體偶聯(lián)得到。

6.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的終止液為1~2mol/L的硫酸或鹽酸溶液，所述底物顯色液由底物液A液和底物液B液組成，所述底物液A液為過氧化脲溶液，底物液B液為四甲基聯(lián)苯胺溶液。

7.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所用包被緩沖液為pH9.0~9.6，0.1~0.2mol/L碳酸鹽緩沖液，所用封閉液為pH7.2~7.6，0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量百分比。

8.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的濃縮洗滌液為pH7.2~7.6，含0.5%~1.0%吐溫-20和0.01‰~0.05‰的疊氮化鈉防腐劑的0.1~0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述的復溶液為pH值為7.0~7.2，含有5%~10%酪蛋白、0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量百分比。

9.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述維生素B12標準品溶液濃度分別為0μg/L、0.2μg/L、0.6μg/L、1.8μg/L、5.4μg/L。

10.一種檢測樣品中維生素B12含量的方法，主要步驟包括：

1）將待測樣品進行前處理；

2）用權利要求1-9任一項所述的酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測；

3）分析檢測結果。