[發明專利]檢測牛凝血因子XI基因第9外顯子內15bp插入突變的試劑盒

無效

• 申請號: 201210266722.2
• 申請日: 2012-07-30
• 公開（公告）號: CN102776288A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 張毅;王雅春;李強;張沅;吳蒙;徐仙洲;俞英;孫東曉;張勝利
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.用于檢測牛凝血因子XI基因第9外顯子內15bp插入突變的PCR引物組合，其為：

引物對1：

a）上游引物wild-F?5’-CTGCTGTGCAGTGTTCTGCC-3’；

b）下游引物wild-R?5’-GGAGCGTCTATGGGACTTGA-3’；和

引物對2：

a′）上游引物mutant-F?5’-TGCAAGCCCTTTCTTCTGAT-3’；

b′）下游引物mutant-R?5’-AATGGCATATATTCTGCACA-3’。

2.含有權利要求1所述引物組合的檢測牛凝血因子XI基因第9外顯子內15bp插入突變的試劑盒。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的一種或多種。

4.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

5.權利要求1所述引物組合或權利要求2-4任一項所述試劑盒在檢測牛凝血因子XI基因第9外顯子內15bp插入突變中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1）提取待測牛的基因組DNA；

2）以步驟1）中提取的DNA為模板，分別采用引物對1和引物對2，進行PCR擴增反應；

3）分析PCR產物。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟3）具體為：

擴增反應結束后，將分別用引物對1和引物對2擴增的產物混合，進行瓊脂糖凝膠電泳，根據電泳檢測結果判斷待測牛的基因型：若擴增結果僅出現一條206bp的DNA條帶，則判定待測牛的基因型為不含15bp插入突變的野生型純合子；若擴增結果僅出現一條112bp的DNA條帶，則判定待測牛的基因型為含15bp插入突變的突變純合子；若擴增結果出現206bp和112bp兩條DNA條帶，則判定待測牛的基因型為含15bp插入突變的雜合子。

8.根據權利要求6或7所述的應用，其特征在于，PCR反應體系以20μl計為：

9.根據權利要求6或7所述的應用，其特征在于，PCR反應條件為：94℃7min；94℃30s，57℃30s，72℃30s，共35個循環；72℃7min。