[發(fā)明專利]一種特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶檢測方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210261403.2
• 申請日: 2012-07-26
• 公開（公告）號: CN102796804A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于嘉屏
• 申請（專利權(quán)）人: 上海迪安醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶特異性檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

血清中的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGT，EC2.3.2.2)是以同工酶或多種分子形式存在的，有些GGT能與脂蛋白結(jié)合在一起，如與低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)結(jié)合，但其形成原因及生理功能尚不清楚。現(xiàn)有技術(shù)中，關(guān)于血清GGT總活性測定是臨床常規(guī)開展的酶學(xué)檢測項目，其在急性病毒性肝炎、慢性肝炎、肝炎后肝硬化、肝內(nèi)膽汁淤積、肝外膽道阻塞、原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌時，均有不同程度增高；但血清中GGT總活性測定特異性低，無法作為與之相關(guān)疾病的特異性檢查，尤其是對于肝癌與其他肝病的鑒別診斷尚缺乏特異性的檢測方法及其配套產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶檢測方法及其應(yīng)用，是特異性針對與血清中低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白結(jié)合的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶活性，以實現(xiàn)用簡便、快捷的方法來檢測樣品中肝癌及其其他嚴(yán)重肝病的鑒別診斷。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶檢測方法，具體為：通過檢測以抗載脂蛋白B抗體(Apo?B抗體)與低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)間形成的免疫沉淀結(jié)合物前后的血清中的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性差值。

作為一種優(yōu)選方案，所述的抗載脂蛋白B抗體與低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)間形成的免疫沉淀結(jié)合物后的血清中的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性為形成免疫結(jié)合物后經(jīng)離心的上清液中的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性。

作為進一步優(yōu)選方案，所述的檢測γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性的方法為以L-γ-谷氨酰-3-羧基-對硝基苯胺(3-carboxy-GGPNA)為底物且能在全自動生化分析儀上應(yīng)用的連續(xù)監(jiān)測法。

作為更進一步優(yōu)選方案，上述檢測方法包括如下步驟：

4)測定樣品血清中的總γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性；

5)加入抗載脂蛋白B抗體液及沉淀劑，5～30分鐘后，離心，取上清液，測定上清液中的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性；

6)計算步驟1)與步驟2)中的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶的活性差值。

一種特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶檢測方法的應(yīng)用，是指以上述方法制備用于診斷或輔助診斷肝癌的診斷試劑或診斷試劑盒。

作為一種優(yōu)選方案，上述的診斷試劑或診斷試劑盒，包括抗載脂蛋白B抗體液、緩沖液、沉淀劑。

作為進一步優(yōu)選方案，所述的緩沖劑為pH7.0，30mmol/L?MOPS緩沖液。

作為進一步優(yōu)選方案，所述的沉淀劑為30％聚乙二醇6000。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種簡單有效的診斷或輔助診斷肝癌的診斷試劑或診斷試劑盒，實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的特異性檢測血清LDL/VLDL-GGT活性方法可用于檢測或輔助檢測肝癌的診斷試劑或診斷試劑盒，平均診斷特異性可達(dá)70％以上，平均陽性預(yù)測值為90％。因此，其應(yīng)用前景十分廣闊。

附圖說明

圖1為本發(fā)明提供的特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例及對比例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)、完整地說明。

實施例

1、制備特異性γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(10人份)，具體如圖1所示，其中包括三管試劑，分別為：

抗體液(1)：抗人Apo?B抗體+緩沖液；

緩沖液(2)pH7.0，30mmol/L?MOPS；

沉淀劑(3)：30％聚乙二醇6000。

A.試劑組成：

1)對照組(總活性組)：pH7.0，30mmol/L?MOPS緩沖液850μL。

2)抗體組(待測定組)：含抗載脂蛋白B抗體850μL、30％聚乙二醇6000沉淀劑420μL。

B.操作步驟：

(1)抗體組：在離心試管內(nèi)加入患者血清標(biāo)本100μL，抗體液80μL，沉淀劑20μL，37℃放置20min，離心(5500g×5min)，取上清液在生化分析儀上測定GGT活性。

(2)對照組：在離心試管內(nèi)加入患者血清標(biāo)本100μL，緩沖液80μL，沉淀劑20μL，37℃放置20min，離心(5500g×5min)，取上清液在生化分析儀上測定GGT活性。

(3)結(jié)果計算：LDL/VLDL-GGT活性(U/L)＝(對照組管-抗體組管)×2。