[發(fā)明專利]基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210260940.5
• 申請日: 2012-07-25
• 公開（公告）號: CN103571932A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 李玉占
• 申請（專利權(quán)）人: 上海賽弗生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

1.一種基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法，其特征在于，使用耐熱核酸酶HII切斷帶有核糖核苷酸的分子信標，將熒光信號積累下來，檢測雙鏈DNA；其中，所述帶有核糖核苷酸的分子信標為中間帶有一個核糖核酸，兩側(cè)的核苷酸彼此配對，兩側(cè)分別用熒光發(fā)射基團和熒光淬滅基團標記，整個分子信標形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，無熒光釋放出來。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括與PCR擴增偶聯(lián)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法，其特征在于，所述熒光發(fā)射基團為FAM或TET；所述熒光淬滅基團為DACBYL。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法，其特征在于，所述分子信標長33個核苷酸，中間帶有一個核糖核苷酸，中間的21個核苷酸與檢測樣本DNA配對，兩側(cè)的6個核苷酸彼此配對。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法，其特征在于，所述分子信標為

Amp-T：

5’FAM-CGCGCCAGTAAGGGAAruAGGAAGTACTGGCGCG-DABCYL、

Amp-A：

5’FAM-CGCGCCAGTAAGGGAAraAGGAAGTACTGGCGCG-DABCYL、

Amp-C：

5’FAM-CGCGCCAGTAAGGGAArcAGGAAGTACTGGCGCG-DABCYL、或

Amp-G：

5’FAM-CGCGCCAGTAAGGGAArgAGGAAGTACTGGCGCG-DABCYL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于耐熱核酸酶HII的單核苷酸多態(tài)性檢測方法，其特征在于，所述檢測方法具體包括：

步驟Ⅰ，制備中間帶一個核糖核苷酸的分子信標；

步驟Ⅱ，檢測反應體系的建立；

將擴增目標DNA的引物序列、dNTP、Taq?DNA聚合酶、Tth核酸酶HII、分子信標和檢測樣本DNA加入Taq酶催化的反應體系中，配制反應混合物；

步驟Ⅲ，熒光信號放大反應；

將步驟Ⅱ中的反應混合物，放入熒光定量PCR儀中，進行PCR擴增和基因分型檢測；

步驟Ⅳ，確定基因多態(tài)性；

根據(jù)不同樣本間熒光信號的差異，確定檢測樣本待測位點的單核苷酸多態(tài)性。