[發明專利]一種快速檢測灰霉病菌對殺菌劑敏感性的方法

無效

• 申請號: 201210259733.8
• 申請日: 2012-07-25
• 公開（公告）號: CN102759513A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 劉峰;幕衛;楊曉楠
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速測定殺菌劑對灰霉病菌孢子萌發抑制率以及對孢子萌發和菌絲生長綜合抑制率的方法，其特征是，步驟如下：

1）將用PDE洗脫、過濾獲得的孢子懸浮液加入到96孔板中，再加入經稀釋過的藥劑，獲得相應的藥劑質量濃度，并設置空白對照組；

2）用封口膜將96孔板密封嚴實，于酶標儀上測定OD值(對照0h吸光度值為OD₀，各處理0h吸光度值為OD₁)，于21℃黑暗條件下振蕩（150r/min）培養，分別于24h、36h時再測定OD值，按照公式(1)計算藥劑對分生孢子萌發的抑制率（24h時）及對孢子萌發和菌絲生長的綜合抑制率（36h時），

2.一種快速測定殺菌劑對灰霉病菌菌絲生長抑制率的方法，其特征是，步驟如下：

1）將用PDE洗脫、過濾獲得的孢子懸浮液加入到96孔板中，將其于21℃黑暗條件下振蕩（150r/min）培養12h后，再加入經稀釋過的藥劑，獲得相應的藥劑質量濃度，設置空白對照組；

2）用封口膜將96孔板密封嚴實，于酶標儀上測定OD值(對照0h吸光度值為OD₂，各處理0h吸光度值為OD₃)，于21℃黑暗條件下振蕩（150r/min）再培養，于12-24h后再測定OD值。按照公式（2）計算藥劑對菌絲生長的抑制率，

3.根據權利要求1、2所述的快速測定方法，其特征是，步驟1）所述的PDE培養基，其配置方法為：馬鈴薯200g，煮好過濾后加入葡萄糖20g，加去離子水至1L，經滅菌后每升加入激動素0.01g，赤霉素0.05g，維生素B2?0.15g，FeCl₃?0.15g，CaCl₂?0.2g，鏈霉素（50μg/mL）且用1mol/L?NaOH調節至pH值4.5。

4.根據權利要求1、2所述的快速測定方法，其特征是，步驟1）所述的所述孢子懸浮液孢子濃度為8×10⁵～1.6×10⁶個/mL，每孔加入的孢子懸浮液和藥劑的量分別為180μL和20μL。

5.根據權利要求1、2所述的快速測定方法，其特征是，步驟2）所述酶標儀測定波長為630nm。

6.根據權利要求1所述的快速測定方法，其特征是，步驟2）所述測定時間分別為24h和36h。

7.根據權利要求2所述的快速測定方法，其特征是，步驟2）所述測定時間為12-24h。