[發明專利]一種從燕窩中提取牛磺酸的方法及其檢測方法

無效

• 申請號: 201210248604.9
• 申請日: 2012-07-18
• 公開（公告）號: CN102735790A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 張北山;馬夫翠;劉代成
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N1/28
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

技術領域

本發明涉及一種從燕窩中提取牛磺酸的方法及其檢測方法。

背景技術

燕窩是一種名貴的傳統中藥和保健食品，來源于雨燕科動物金絲燕及多種同屬燕類用唾液與絨羽等混合凝結所筑成的巢窩。在《本草綱目》上對燕窩的藥用價值的，評價為：味甘淡平，大養肺陰，化痰止嗽，補而能清，為調理虛損勞瘵之圣藥。一切病之由于肺虛不能清肅下行者，用此皆可治之；開胃氣，已勞痢，益小兒痘疹，可入煎藥，或單煮汁服。燕窩的產地主要是馬來西亞和印尼，因為燕窩的產量少，藥用價值高，加上燕窩的價格昂貴。市面上很多不法商販，利用不同的原料，進行添加和造假燕窩。檢測氨基酸的含量作為真假燕窩的依據受到大多數商家認可。目前現有技術中尚無一種行之有效的檢測方法。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種從燕窩中提取牛磺酸的方法及其檢測方法。本發明檢測燕窩中牛磺酸的含量，作為檢測真假燕窩的指標之一，操作簡單，快速，準確，可靠。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種從燕窩中提取牛磺酸的方法，步驟如下：

（1）取燕窩，粉碎，按燕窩（W）：水（V）=1：3～9（單位g：ml）的比例加入水，在常溫下超聲（40MHz）提取1～3次，每次時間為30～60分鐘，提取之后進行離心（9000rpm，10分鐘），合并上清液；

（2）向上述離心好的上清液中按上清液（W）：無水乙醇（V）=3：5～7（單位g：ml）的比例加入無水乙醇，在閉光的容器內放置0.5～1小時，然后取出上清液（直接倒出或虹吸或過濾）；

（3）上述上清液在50～65℃條件下旋轉蒸發濃縮，得到濃縮液，干燥后即得到含牛磺酸的粉末狀物質。

一種牛磺酸的薄層層析檢測方法，步驟如下：

（1）取樣品液（即上述步驟（3）得到的濃縮液）10μl點在涂有硅膠GF₂₅₄的高效薄層板（10cm×10cm）上，以正丙醇（v）：無水乙醇（v）：水（v）：冰乙酸（v）=5～7：0.5～1：1～2：1～2作為展開劑，在展開缸（10cm×12cm×15cm）內展開，展距為6cm，并采用外標一點法點1μl（0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml）牛磺酸標準品溶液，同時展開，展開的時間為60分鐘，展開的距離為6cm；

（2）展完后取出展板晾干，以質量濃度為1～2％的水合茚三酮的乙醇溶液為染色液噴霧染色在板上，放進烘箱里烘干5分鐘，溫度為110℃，其R_f=0.62。

（3）將烘干后的展板放在薄層掃描儀上，以485nm吸收波長進行掃描，通過檢測樣品和標準品的吸光度并計算得到燕窩中牛磺酸的含量。

上述檢測方法，還需要進行以下輔助工作：繪制標準曲線：

取Sigma公司銷售的牛磺酸標準品溶解于水，其濃度分別為0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml，在高效薄層板上各點1μl，用Camag薄層掃描儀3，以485nm的吸收波長掃描，經掃描儀的軟件Wincats1.4.1統計，得到的線性方程Y=4234.5154+20.6178X，相關系數r=0.99928，RSD=1.87％。

經多次檢測和計算，真品燕窩中的牛磺酸含量為12.620～12.720μg／g。

本發明的牛磺酸的薄層層析檢測方法，其精確度、板內變異、板間變異、加樣回收率等情況如下：

1.精確度的測定

制備0.24mg／ml牛磺酸標準溶液，在同一塊高效薄層板上點四個點，每點為1μl，分別在0，2，4，6和8小時掃描測量，證明了4小時后才穩定，如表1所示。

2.板內變異和板間變異

在板上分別滴1μl即0.24mg／ml和0.48mg／ml標準品溶液每隔12小時掃描定量，共測定2天。測得板內變異為0.94％～2.45％，而板間變異為0.33％～2.78％，如表2所示。

3.加樣回收率

向提取配制的樣品液中，加50，100和150％的牛磺酸標準品，其加樣平均回收率為99.68％，如表3所示。

表1精確度

表2板內變異和板間變異

表3加樣回收率