[發明專利]一種耐酸性高溫α-淀粉酶及其基因、工程菌和制備方法有效
| 申請號： | 201210246909.6 | 申請日： | 2012-07-17 |
| 公開（公告）號： | CN102787130A | 公開（公告）日： | 2012-11-21 |
| 發明（設計）人： | 劉逸寒;路福平;樊帥;徐艷靜;胡博;王春霞;王建玲 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12N15/56 | 分類號： | C12N15/56;C12N15/10;C12N1/21;C12N9/28;C12R1/125;C12R1/10 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人： | 王來佳 |
| 地址： | 300457 天津市濱海新*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 耐酸 高溫 淀粉酶 及其 基因 工程 制備 方法 | ||
1.一種耐酸性高溫α-淀粉酶基因，其特征在于：其基因序列為序列8。
2.一種如權利要求1所述的耐酸性高溫α-淀粉酶基因的構建方法，其特征在于：方法為：將耐高溫α-淀粉酶基因進行定點突變，第1058位堿基C→T，第1199位堿基A→G，得到耐酸性高溫α-淀粉酶基因；所述耐高溫α-淀粉酶基因為序列7。
3.一種耐酸性高溫α-淀粉酶工程菌，其特征在于：含有如權利要求1所述的耐酸性高溫α-淀粉酶基因。
4.根據權利要求3所述的耐酸性高溫α-淀粉酶工程菌，其特征在于：所述工程菌的宿主細胞為枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌。
5.根據權利要求3所述的耐酸性高溫α-淀粉酶工程菌，其特征在于：所述工程菌為6種胞外蛋白酶缺失的枯草芽孢桿菌B.subtilis?WB600。
6.根據權利要求3、4或5所述的耐酸性高溫α-淀粉酶工程菌，其特征在于：所述工程菌中的表達載體為大腸桿菌-芽孢桿菌穿梭質粒pBSA43。
7.一種耐酸性高溫α-淀粉酶，其特征在于：具有如權利要求1所述的基因編碼的蛋白序列。
8.根據權利要求7所述的耐酸性高溫α-淀粉酶，其特征在于：所述的α-淀粉酶在溫度90℃，pH4.5下活力穩定。
9.一種如權利要求7所述的耐酸性高溫α-淀粉酶的制備方法，其特征在于：步驟如下：
⑴將耐高溫α-淀粉酶基因進行定點突變，第1058位堿基C→T，第1199位堿基A→G，得到耐酸性高溫α-淀粉酶基因；所述耐高溫α-淀粉酶基因見序列7；
⑵將上述耐酸性高溫α-淀粉酶基因與表達載體連接，構建獲得攜帶有耐酸性高溫α-淀粉酶基因的重組載體；
⑶將重組載體轉化入宿主菌株中，構建獲得重組菌株；
⑷重組菌株分泌表達，發酵制備耐酸性高溫α-淀粉酶。
10.根據權利要求9所述的耐酸性高溫α-淀粉酶的制備方法，其特征在于：所述步驟⑵中的表達載體為大腸桿菌-芽孢桿菌穿梭質粒pBSA43。
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