[發(fā)明專(zhuān)利]儀寧小麥抗小麥黃花葉病毒主效QTL的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210246844.5
• 申請(qǐng)日: 2012-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102807984A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秀娥;郭嬌;吳真真;朱曉彪;王海燕;曹愛(ài)忠;肖進(jìn)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/11
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了‘儀寧小麥’抗小麥黃花葉病毒主效QTL的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

普通小麥(Triticum?aestivum?L)有21對(duì)染色體，每對(duì)包含兩條一樣的染色體，這21條染色體分別為1A、1B、1D、2A、2B、2D、3A、3B、3D、4A、4B、4D、5A、5B、5D、6A、6B、6D、7A、7B、7D，普通小麥通常用AABBDD表示（圖1）。每條染色體又包含長(zhǎng)臂和短臂，分別用L和S表示，比如2D染色體包括長(zhǎng)臂2DL和短臂2DS。?

小麥作為世界性的重要糧食作物，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有舉足輕重的地位，但由真菌—禾谷多黏菌（Polymyxa?graminis）（見(jiàn)參考文獻(xiàn)：Inouye?T(1969)Viral?pathogen?ofthe?wheat?yellow?mosaic?disease.Nogaku?Kenkyu53：61-68）介導(dǎo)的小麥黃花葉病毒（Wheat?yellow?mosaic?bymovirus，WYMV）引起的小麥黃花葉病（Wheat?yellow?mosaic，WYM）對(duì)小麥的生長(zhǎng)發(fā)育及產(chǎn)量造成了嚴(yán)重危害，正日益成為危害我國(guó)和日本等亞洲國(guó)家小麥生產(chǎn)的最嚴(yán)重的病害之一（見(jiàn)參考文獻(xiàn)：1、陶家鳳，秦家忠，肖際亨，沈言章，趙福臻，李天眷，謝貽遠(yuǎn)，何代富，饒有后，黃顯華（1980）四川土傳小麥黃色花葉病的研究.植物病理學(xué)報(bào)10：5-25；2、于善謙，陳仲宜，徐來(lái)升，張若平，王鳴岐，羅瑞梧（1986）發(fā)生在我國(guó)的小麥黃花葉病毒病.植物保護(hù)學(xué)報(bào)13：217-219；3、李大偉，韓成貴，邢怡明，田兆豐，于嘉林，蔡祝南，劉儀（1997）中國(guó)小麥黃花葉病毒（WYMV）分布的RT-PCR鑒定.植物病理學(xué)報(bào)27：303-307）。將抗性主效QTL/基因引入小麥栽培品種，培育和推廣抗病毒品種是目前生產(chǎn)上防治小麥黃花葉病最經(jīng)濟(jì)有效的方法。?

普通小麥品種‘儀寧小麥’（公知公用，見(jiàn)參考文獻(xiàn)：侯慶樹(shù)（1993）抗梭條花葉病小麥新品種－儀寧小麥.江蘇科技短訊9（4）：7-10）具有耐旱、耐寒、耐肥、抗倒等性狀優(yōu)良，抗病性較好，綜合性狀優(yōu)良。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)細(xì)胞遺傳所對(duì)‘儀寧小麥’抗黃花葉病進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明‘儀寧小麥’對(duì)小麥黃花葉病表現(xiàn)出高抗，‘鎮(zhèn)9523’表現(xiàn)高感。為了進(jìn)一步研究‘儀寧小麥’對(duì)小麥黃花葉病的抗性遺傳機(jī)制和定位抗性QTL，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)細(xì)胞遺傳所以高抗小麥黃花葉病的‘儀寧小麥’作母本、高感小麥抗黃花葉病的‘鎮(zhèn)9523’（審定品種）作?父本、構(gòu)建了F_2：8重組自交系群體（Recombinant?inbred?Iine，RIL），并開(kāi)展了利用該RIL群體進(jìn)行抗性QTL定位以及與主效QTL緊密連鎖分子標(biāo)記的篩選工作，以及進(jìn)一步利用“RIL11－14×鎮(zhèn)9523”次級(jí)F₂分離群體進(jìn)行抗病主效QTL?QYm.nau-2D.1精細(xì)定位的研究。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供來(lái)自普通小麥品種‘儀寧小麥’的抗小麥黃花葉病主效QTLQYm.nau-2D.1緊密連鎖分子標(biāo)記2EST730。?

本發(fā)明的另一目的是提供該分子標(biāo)記的引物對(duì)。?

本發(fā)明的又一目的是提供該分子標(biāo)記的應(yīng)用。?

本發(fā)明的目的可通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：?

‘儀寧小麥’中抗小麥黃花葉病主效QTL?QYm.nau-2D.1的分子標(biāo)記2EST730，該分子標(biāo)記2EST730的上游引物2EST730F序列如SEQ?ID?NO.1所示，下游引物2EST730R序列如SEQ?ID?NO.2所示。?

所述的分子標(biāo)記2EST730與QYm.nau-2D.1之間的遺傳距離為0.3cM。?

所述的分子標(biāo)記2EST730的引物對(duì)，其上游引物2EST730F序列如SEQ?ID?NO.1所示，下游引物2EST730R序列如SEQ?ID?NO.2所示。?

抗小麥黃花葉病主效QTL?QYm.nau-2D.1的分子標(biāo)記方法，包括：以待鑒定材料的DNA作為模板，用權(quán)利要求3所述的分子標(biāo)記2EST730的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；PCR產(chǎn)物進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，再用銀染法檢測(cè)；能擴(kuò)增出約600bp特異條帶的植株為含有抗小麥黃花葉病主效QTL?QYm.nau-2D.1的植株。?

所述的抗小麥黃花葉病主效QTL?QYm.nau-2D.1的分子標(biāo)記方法，優(yōu)選包括如下步驟：?

（1）以待鑒定材料的DNA作為模板，用權(quán)利要求3所述的分子標(biāo)記2EST730的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；?