[發明專利]尿酸氧化酶的變體形式及其用途

無效

• 申請號: 201210246326.3
• 申請日: 2006-04-11
• 公開（公告）號: CN102807973A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: J.哈特曼;S.門德洛維茨
• 申請（專利權）人: 薩文特醫藥公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;A61K38/44;A61K47/48;A61P19/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀

本申請是以下申請的分案申請：申請日：2006年4月11日；申請號：200680020689.8(PCT/US2006/013502)；發明名稱：同上。

相關申請的交叉引用

本申請要求2005年4月11日提交的美國臨時申請系列號60/670,541的優先權和權益，該臨時申請的公開內容通過引用結合到本文中。

發明領域

本發明涉及遺傳修飾的具有尿酸分解活性的蛋白質。更具體的說，本發明涉及包含截短的尿酸氧化酶的蛋白質及其生產方法。

發明背景

術語尿酸氧化酶(urate?oxidase)和尿酸酶(uricase)在本文中可互換使用。尿酸氧化酶(尿酸酶；E.C.1.7.3.3)這種酶能催化尿酸氧化成更具可溶性的產物尿囊素，尿囊素是更容易排泄的嘌呤代謝物。人不產生有酶活性的尿酸酶，這是因為在高等靈長類的進化過程中獲得的尿酸酶基因的幾個突變所致。Wu,X等,(1992)J?Mol?Evol34:78-84，該文獻通過引用整體結合到本文中。因此，在易感個體中，血液中過量濃度的尿酸(高尿酸血癥)會導致疼痛性關節炎(痛風)、毀形性尿酸沉積(結節瘤)和腎衰竭。在一些受侵害個體中，可用的藥物如別嘌醇(尿酸合成的抑制劑)會產生治療限制性副作用，或者不能充分減輕這些病癥。Hande,KR等,(1984)Am?J?Med?76:47-56；Fam,AG,(1990)Bailliere's?Clin?Rheumatol?4:177-192，每個文獻通過引用整體結合到本文中。尿酸酶注射能減少高尿酸血癥和高尿酸尿癥，至少是短暫地減少。由于尿酸酶在人體中是異種蛋白，在某些百分比的受治療患者中，即使是第一次注射來自黃曲霉(Aspergillus?flavus)的未修飾蛋白質就會引起過敏反應(Pui,C-H等,(1997)Leukemia11:1813-1816，該文獻通過引用整體結合到本文中)，免疫應答限制其用于長期或間歇治療的效用。Donadio,D等,(1981)Nouv?Presse?Med10:711-712；Leaustic,M等,(1983)Rev?Rhum?Mal?Osteoartic50:553-554，每個文獻通過引用整體結合到本文中。

本發明涉及發生截短和結構穩定性增強的突變重組尿酸酶蛋白。

發明概述

本發明的目的是提供新型的重組尿酸酶蛋白。所設想的本發明蛋白質相對于天然尿酸酶蛋白是截短的，且具有突變的氨基酸。

本發明提供包含SEQ?ID?NO.8氨基酸序列的突變重組尿酸酶。還提供包含SEQ?ID?NO.13氨基酸序列的突變重組尿酸酶。

本發明的另一個目的是提供代謝尿酸的方法，所述方法包括給予具有尿酸分解活性的新型重組尿酸酶蛋白。尿酸分解活性在本文中用以指尿酸向尿囊素的酶促轉化。

在一個實施方案中，尿酸酶包含SEQ?ID?NO.7或SEQ?ID?NO.12的8位至287位的氨基酸序列。本發明還提供了包含SEQ?ID?NO.8或SEQ?ID?NO.13的氨基酸序列的尿酸酶。在一個實施方案中，尿酸酶包含氨基末端氨基酸，其中氨基末端氨基酸是丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、絲氨酸或蘇氨酸。在一個特別實施方案中，氨基末端氨基酸是甲硫氨酸。

本發明還提供分離的核酸，其包含編碼本發明尿酸酶的核酸序列。在一個具體實施方案中，編碼尿酸酶的核酸有效連接到異源啟動子，例如osmB啟動子。本發明還提供包含尿酸酶編碼核酸的核酸載體和包含這種載體的宿主細胞，以及產生尿酸酶的方法，所述方法包括在所述核酸序列得以被宿主細胞表達的條件下培養宿主細胞以及分離表達的尿酸酶的步驟。

附圖簡述

圖1說明質粒pOUR-P-ΔN-ks-1的結構。限制位點旁的數字表示核苷酸位置，該位置相對于指定為1的HaeII位點而言。在克隆過程中丟失的限制位點在括號中標出。

圖2顯示豬-KS-ΔN尿酸酶的DNA和推導氨基酸序列(分別為SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.7)。圖2中的氨基酸編號是相對于完全豬尿酸酶序列進行的。在起始密碼子甲硫氨酸殘基之后，蘇氨酸置換豬尿酸酶序列中的天冬氨酸7。指出了用于亞克隆的各個步驟的限制位點。3'非翻譯序列用小寫字母顯示。翻譯終止密碼子由星號表示。