[發明專利]檢測艾滋病相關支原體的引物、探針組合及試劑盒

有效

• 申請號: 201210245081.2
• 申請日: 2012-07-13
• 公開（公告）號: CN102787165A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 趙飛;張建中;王艷冬;肖迪;張慧芳;何利華;孟凡亮
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/35
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種用于同時檢測艾滋病相關支原體的三重熒光PCR引物組合，所述艾滋病相關支原體為穿透支原體（Mycoplasma?penetrans）、發酵支原體（Mycoplasma?fermentans）和梨支原體（Mycoplasma?pirum）。

2.如權利要求1所述的引物組合，其中檢測穿透支原體的引物序列為：

Mpen-F:ACGTGAGTTAACCATGTA

Mpen-R:GGTTCGTCTTCTATCTAATAG；

檢測發酵支原體的引物序列為：

Mfer-F:TGCTGTTTCAATGTCATC

Mfer-R:AGACCGAGCTATTAAAGC；

檢測梨支原體的引物序列為：

Mpi-F:CGTGATTTCTTTAATACTCATC

Mpi-R:CACGAATATCCAAGTTAGG。

3.與權利要求2所述引物組合配合使用的熒光探針組合，其特征在于，與穿透支原體的引物配合使用的探針核苷酸序列為：

Mpen-P:FAM-TTACCAGCACCACCAATACCAATAAT-BHQ1

與發酵支原體的引物配合使用的探針核苷酸序列為：

Mfer-P:HEX-TTGATGATGCTTTAATGACTCCACTTT-BHQ1

與穿透支原體的引物配合使用的探針核苷酸序列為：

Mpi-P:ROX-CCAGGTCCCATTGCTGAAATTCT-BHQ2。

4.權利要求2所述的引物組合和權利要求3所述的熒光探針組合在制備艾滋病相關支原體的檢測試劑盒或診斷試劑中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，將Platium?quantitative?PCR?super?Mix?UDG12.5μl，50mM?MgCl₂2.0μl；Platium?Taq0.25μl；dNTP混合溶液1.0μl；Mfer-F和Mfer-R各0.8μl；Mfer-P0.4μl；Mpen-F和Mpen-R各0.5μl；Mpen-P0.2μl；Mpi-F和Mpi-F各0.3μl；Mpi-P0.1μl，無核酸酶水0.35μl；待測樣品DNA模板5.0μl構成25μl的檢測反應體系；上述引物和探針濃度均為25μM。

6.如權利要求4或5所述的應用，其特征在于，試劑盒工作條件為95℃3min，1個循環；95℃15s，57℃-60℃15s，40個循環；然后終止反應。

7.一種艾滋病相關支原體的診斷試劑，其特征在于，含有權利要求2所述的引物組合和權利要求3所述的熒光探針組合；所述艾滋病相關支原體為穿透支原體（Mycoplasma?penetrans）、發酵支原體（Mycoplasma?fermentans）和梨支原體（Mycoplasma?pirum）。

8.一種艾滋病相關支原體的檢測試劑盒，其特征在于，含有權利要求2所述的引物組合和權利要求3所述的熒光探針組合；所述艾滋病相關支原體為穿透支原體（Mycoplasma?penetrans）、發酵支原體（Mycoplasma?fermentans）和梨支原體（Mycoplasma?pirum）。

9.如權利要求8所述的檢測試劑盒，其特征在于，其25μl的檢測反應體系的具體配置為：Platium?quantitative?PCR?super?Mix?UDG12.5μl，50mM?MgCl₂2.0μl；Platium?Taq0.25μl；dNTP混合溶液1.0μl；Mfer-F和Mfer-R各0.8μl；Mfer-P0.4μl；Mpen-F和Mpen-R各0.5μl；Mpen-P0.2μl；Mpi-F和Mpi-F各0.3μl；Mpi-P0.1μl，無核酸水0.35μl；待測樣品DNA模板5.0μl；上述引物和探針濃度均為25μM。

10.如權利要求8或9所述的檢測試劑盒，其特征在于，其工作條件為95℃3min，1個循環；95℃15s，57℃-60℃15s，40個循環。