[發明專利]定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒及檢測方法

無效

• 申請號: 201210244006.4
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN102735850A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 李寧;方佩華;陳慧;譚建;柴錦燕
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學總醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

1.一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒，其特征在于：該試劑盒內收容有預包被重組人促甲狀腺素受體膜外區羧基端片段融合蛋白抗原的96孔酶標板，以及瓶裝的以下試劑：磷酸鹽漂洗液，封閉液，樣品稀釋液，促甲狀腺素受體抗體標準液，辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG第二抗體，顯色底物四甲基聯苯胺、反應終止液2M硫酸和質控血清。

2.如權利要求1所述一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒，其特征在于：96孔酶標板預包被抗原是重組的人促甲狀腺激素受體膜外區羧基端片段融合蛋白，是經以下重量份數比的原料制成pH9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋后包被的，碳酸鈉0.79份、碳酸氫鈉1.47份、去離子水500份。

3.如權利要求1所述一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒，其特征在于：所述的磷酸鹽漂洗液是按以下重量份數比的原料制成pH7.4的液體，磷酸二氫鉀0.3份、磷酸氫二鈉3.6份、氯化鈉8.0份、氯化鉀0.2份、吐溫-20?0.5份和去離子水1000份配制成。

4.如權利要求1或3所述一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒，其特征在于：封閉液是按重量百分比，含1.0-5.0%?牛血清白蛋白的磷酸鹽漂洗液。

5.如權利要求1所述一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒，其特征在于：樣品稀釋液是按以下重量份數比的原料制成pH7.4液體，磷酸二氫鉀0.3份、磷酸氫二鈉3.6份、氯化鈉8.0份、氯化鉀0.2份、吐溫-20?0.5份、牛血清白蛋白10-15份、去離子水1000份。

6.如權利要求1或5所述一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析試劑盒，其特征在于：促甲狀腺素受體抗體標準液是促甲狀腺素受體抗體陽性血清用樣品稀釋液配制而成，濃度分別是200AU/ml，80AU/ml，40AU/ml，20AU/ml，10AU/ml。

7.如權利要求1所述一種定量檢測人血清促甲狀腺素受體抗體的酶聯免疫分析的檢測方法，其特征在于：按以下步驟檢測，

①取出已預包被抗原的96孔酶標板，待測血清用樣品稀釋液稀釋100倍，每孔加稀釋后的待測血清100μl；標準曲線各孔分別加濃度為200AU/ml，80AU/ml，40AU/ml，20AU/ml，10AU/ml的標準液100μl，37℃溫育1小時；??

②甩掉反應液，每孔用200-300μl磷酸鹽漂洗液洗3次，拍干；

③每孔加辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG第二抗體100μl，37℃溫育1小時；

④甩掉反應液，每孔用200-300μl磷酸鹽漂洗液洗6次，拍干；?

⑤每孔加顯色底物四甲基聯苯胺100μl，37℃溫育15分鐘；?

⑥每孔加反應終止液2M硫酸50μl，混勻后30分鐘內在酶標儀上測定450納米波長處的吸光度值；

⑦在計算機中分別輸入標準液和待測樣品的吸光度測定值，根據計算軟件繪制的半對數標準曲線和方程，即可自動計算出各待測樣品中人促甲狀腺素受體抗體且以甲狀腺刺激阻斷性抗體為主的濃度值。