[發明專利]有機磷農藥多殘留快速免疫金標試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201210237844.9
• 申請日: 2012-07-11
• 公開（公告）號: CN103018435A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 劉鳳權;王利民;華修德
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

(一)技術領域

本發明涉及農藥殘留免疫分析技術領域的一種快速檢測器具，特別是涉及以納米膠體金顆粒標記抗體的甲基對硫磷等8種有機磷農藥膠體金快速檢測試紙條。?

(二)背景技術

目前，農藥殘留檢測中，儀器檢測如氣相色譜、高效液相色譜等仍是使用最為廣泛的檢測技術。然而，這一類傳統的檢測方法通常需要貴重的儀器設備，并只能在實驗室環境中進行。于此相比，免疫檢測技術因其簡便、靈敏、經濟而在農藥殘留檢測領域中受到越來越多的關注。?

免疫檢測方法通常分為單殘留檢測和多殘留檢測兩種，多殘留檢測通過對檢測農藥總量的測定而實現多殘留檢測的目的。也就是說，當檢測過程中受測樣品中農藥總量低于每個待檢農藥的殘留標準，則表明受測樣品是合格的。但傳統的免疫檢測方法，如酶聯免疫吸附方法(ELISA)因其反應周期長而制約了其在現場快速檢測中的應用。?

本發明的有機磷農藥多殘留膠體金試紙條，無需專業操作人員及任何輔助類儀器，根據反應所顯現的條帶幾分鐘即可判定結果，不僅操作簡便、快速、結果直觀準確、成本低，并且可以在室外進行檢測。?

(三)發明內容

技術問題本發明的目的克服傳統酶聯免疫吸附檢測技術的不足，研制出一種檢測譜廣、敏感、快速、簡便的有機磷農藥多殘留快速檢測試紙條。?

技術方案一種有機磷農藥多殘留快速檢測試紙條，含有襯板和在襯板上一次銜接的樣品墊、金標結合墊、纖維素膜和吸水墊。金標結合墊為吸附金標抗體的玻璃纖維棉，在纖維素膜上有用甲基對硫磷半抗原偶聯的載體蛋白溶液印制的直線式隱形檢測線，用兔抗鼠IgG印制的直線式隱形對照線，兩條線平行組合。?

所述的襯板為不吸水的韌性材料，用硬質塑膠條或不吸水硬紙條制成。?

所述的樣品墊為玻璃纖維棉。?

所述的吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙或濾油紙。?

所述的纖維素膜為硝酸纖維素膜。?

所述的保護膜為不透明的膠膜，樣品墊、金標結合墊對應的保護膜上印制有待測樣品標記線，該標記線偏向樣品墊一側約0.5厘米處。?

所述的金標抗體為膠體金標記的以O-甲基-O-(4-硝基苯基)-N-(丁酸)硫代磷酸酯為免疫半抗原免疫小鼠而獲得的單克隆抗體，所述的偶聯甲基對硫磷半抗原的載體蛋白為牛血清白蛋?白，或為雞卵清蛋白，或為人血清白蛋白。?

有益效果?

1.檢測譜寬，操作簡便快速：本膠體金試紙條以膠體金標記識別多種農藥通用結構的單克隆抗體為基礎制備而成，金標抗體中的膠體金顆粒與抗體分子之間無共價鍵，兩者通過異性電荷間的范德華力相結合，膠體金的標記對單克隆抗體的識別范圍和親和力影響很小，且具有較高的標記率。并且在使用本膠體金試紙條時，無需任何其他輔助儀器，可現場操作，只要將檢測樣加入樣品墊，在10分鐘內即可判定檢測結果。?

2.結果顯示形象、直觀、準確：膠體金試紙條的檢測結果以纖維素膜上的顯色情況來判斷。如果樣品中有待測物時，待測物和金標抗體結合形成抗原-金標抗體復合物，并且繼續上移，遇檢測線不顯色或顯色很弱即表示檢測樣品陽性或弱陽性；如果樣品中沒有待測樣品時，金標抗體繼續上移，遇檢測線顯示一條清晰紅線即表示檢測樣品陰性。對照線顏色的有無表示此試紙條有效或無效。結構判定形象、直觀、準確、簡單明了。?

3.節省費用，使用范圍廣，便于推廣。使用膠體金試紙條進行檢測，比使用儀器和ELISA試劑盒檢測的費用大幅降低；試紙條的使用范圍廣，可滿足不同層次人員的需要，便于推廣應用，具有廣闊的市場前景和明顯的經濟和社會效益。?

具體實施方式

要制備識別甲基對硫磷等8種有機磷農藥的快速檢測試紙條，首先要制備通用半抗原與載體蛋白的偶聯物，用于印制檢測線，進而制備金標抗體，用于制備金標抗體纖維棉，其次要制備兔抗鼠IgG抗體，用于制備對照線。下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。?

實施例一：(制備實施例)?

1.通用半抗原的合成?

(1)O-甲基-O-(4-硝基苯基)-N-(丁酸)硫代磷酸酯的合成?

稱取4-氨基丁酸0.54g(約5.2mmol)、KOH?0.78g(約11.4mmol)，溶解于6mL甲醇中，冰水浴冷卻至0-10℃，攪拌下緩慢加入溶解于6mL甲醇溶液的(1)1.19g(約4.2mmol)，保溫反應2h。反應完畢后，用石油醚/乙醚(7∶1，體積比)洗滌，水層調pH＝3.0后用乙醚提取，無水硫酸鈉干燥，蒸去溶劑，得淺黃色油狀物(H1)0.87g(產率為60％)?