[發明專利]一種食品中微生物生長曲線自動測繪的方法

無效

• 申請號: 201210230446.4
• 申請日: 2012-07-04
• 公開（公告）號: CN102749516A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 任佳麗;周逸陽;馬麗娜;張慧;李忠海;林親錄
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學
• 主分類號: G01R27/02
• 分類號: G01R27/02;G01R27/22;G01N27/07;G01N1/28
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 歐陽迪奇

技術領域

本發明涉及一種食品中微生物生長曲線自動測繪的方法。

背景技術

世界貿易的全球化同時也帶來了食品安全風險。近年來，世界范圍內屢屢發生食品安全事件，如：美國爆發感染大腸的“菠菜中毒事件”，感染沙門菌的花生醬“沙門事件”，日本上萬人葡萄球菌腸毒素導致的雪印牛奶中毒、英國的瘋牛病、法國的李斯特氏菌感染、泰國的禽流感等等。全球每年發生食源性疾病高達數十億例，發達國家發生食源性疾病的概率也相當高。每年由數十億例食源性疾病而導致的醫療費增加、不安全食品的召回、以及產品的銷毀帶來的經濟損失不可估量！更有甚者，由于抗生素的濫用，全球頻頻出現食源性致病菌的耐藥菌株，其迅速增加與擴散，對相關感染的治療與救治帶來極大挑戰。食品中微生物污染，尤其是耐藥微生物污染，是導致食源性疾病發生和發展的主要原因。實時快速準確地監測食品中的微生物特征，并獲得其菌落總數及其耐藥性，對預防和控制食源性微生物感染，保證人類健康、防止經濟損失具有重要意義。

目前，食源性致病菌的檢測方法主要有培養鑒定、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、多聚酶鏈式反應(PCR)、電阻抗技術以及全自動微生物分析系統等。培養鑒定法是將經過前處理的樣本接種于營養肉湯，然后肉眼觀察細菌的菌落生長，進行陰陽判定。對于陽性樣本，再通過藥敏實驗鑒定。該方法大多要耗費天時間，而且程序復雜，所用試劑繁多，費時費力，等結果出來，疫情可能已經發生；ELISA是把抗原抗體免疫反應的特異性和酶的高效催化作用有機地結合起來的一種檢測技術，它既可測抗原，也可測抗體。該方法靈敏度和特異性較強，但所需試劑昂貴，且需多次洗滌及培養過程；PCR技術采用體外酶促反應合成特異性DNA片段，再通過擴增產物來識別細菌。PCR具有靈敏度高、特異性強、快速等特點，但假陽性和假陰性率過高是影響其應用的關鍵問題。電阻抗技術原理是細菌在培養基內生長繁殖的過程中，將會使培養基的阻抗發生變化，通過檢測培養基的電阻抗變化情況，判定細菌在培養基中的生長繁殖特性，即可檢測出相應的細菌。該法具有檢測速度快、靈敏度高等優點，但由于電路的穩定性問題，導致假陽性率過高；法國生物梅里埃集團公司出品的Vitek-AMS自動微生物檢測系統屬當今世界上最為先進、自動化程度最高的細菌鑒定儀器之一。它無須經過微生物分離培養和純化過程，就能直接從樣品檢出特殊的微生物種類和菌群來。但該系統和配套試劑價格昂貴且需依賴進口，嚴重制約了我國食源性致病菌研究水平的提高。因此，靈敏、快速、準確而且價格便宜的食源性致病菌實時監測設備的研究迫在眉睫。

發明內容

本發明的目的是要克服現有方法不足之處而提供一種自動、快速、準確和可視化的食品中微生物生長曲線實時測繪方法。

為了實現上述技術目的，本發明的技術方案是，一種食品中微生物生長曲線自動測繪的方法，包括以下步驟：

步驟一：取25g食品樣品置于盛有225mL磷酸鹽緩沖液的無菌均質杯內，以8000r/min的速度進行均質2min，制成l：10的樣品勻液；

步驟二：設立微生物生長曲線自動測繪裝置，包括傳感系統、讀數系統和顯示系統三部分，其中傳感系統包括帶有密封蓋的檢測管、控溫裝置、二電極、壓電體聲波傳感器和自激勵電路，所述的檢測管設于控溫裝置內，所述的二電極由底部插入檢測管內，其中一電極連接自激勵電路的輸入端，另一電極連接壓電體聲波傳感器的輸入端，壓電體聲波傳感器的輸出端連接至自激勵電路，所述的讀數系統包括分頻計、驅動電路和單片機，所述的分頻計的輸入端連接至自激勵電路，自激勵電路的輸出端連接至驅動電路，所述的單片機分別連接至自激勵電路和驅動電路，所述的顯示系統包括顯示器，所述的顯示器通過MAX232串口連接至單片機；

步驟三：取9mL培養基和1mL由步驟一所得到的樣品勻液加入至微生物生長曲線自動測繪裝置的檢測管中，擰緊密封蓋；

步驟四：將檢測管插入控溫裝置中，調節控溫裝置溫度為(37±0.2)℃；

步驟五：啟動微生物生長曲線自動測繪裝置；