[發明專利]一種脂肪干細胞免疫抑制效力的檢測方法

有效

• 申請號: 201210220074.7
• 申請日: 2012-06-29
• 公開（公告）號: CN102719546A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 劉廣洋;朱德琳;劉擁軍;徐燚;秦臻;金星
• 申請（專利權）人: 天津和澤干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及干細胞檢測技術，具體地說，涉及一種脂肪干細胞免疫抑制效力的檢測方法。

背景技術

脂肪干細胞（adipose-derived?stem?cells，ADSCs）是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞。這種細胞群易分離，并像骨髓中的間充質干細胞那樣在特定條件下可分化為成骨細胞、軟骨細胞、心肌細胞、脂肪細胞、神經細胞等。研究表明[1]，從人或其他物種上分離出來脂肪干細胞，并且脂肪干細胞的表面抗原與骨髓間充質干細胞基本類似。直接比較人的脂肪干細胞和間充質干細胞的表面抗原，約多于90%都是一致的。實驗表明，脂肪干細胞像骨髓源性的間充質干細胞一樣，經體外擴增后，其具有較低的免疫原性，不會在體內引起T細胞（即胸腺依賴淋巴細胞）的細胞毒性反應。

脂肪干細胞具有很強的免疫調節能力，能夠抑制異常淋巴細胞激活及炎性細胞因子分泌。脂肪干細胞用于自身免疫性疾病已被臨床證實，如脂肪干細胞可治療類風濕關節炎、胰島素依賴型糖尿病、重癥肌無力、慢性潰瘍性結腸炎、系統性紅斑狼瘡、口眼干燥綜合征、類風濕性關節炎、強直性脊柱炎、硬皮病等等，并有確切的療效。移植同種異基因脂肪干細胞將不會引起強烈的免疫反應和后期的排斥反應，為脂肪干細胞的同源異體移植提供了有利條件。此外，脂肪干細胞來源廣泛，可以通過脂肪抽吸術或脂肪切除術從任何人體內獲得，安全無痛苦，且在體外培養穩定，擴增速度快，不易衰老。因此，脂肪干細胞成為目前研究的新熱點，不論在再生醫學還是作為免疫調節劑方面都具有重大的應用潛力。

然而，由于細胞治療本身的特點，脂肪干細胞用于臨床治療還具有某些方面的限制因素。其中最典型的方面是缺乏有效而快捷的具有針對性的生物學效力檢測手段。目前多數臨床前或臨床使用的脂肪干細胞產品都是參照2006年國際細胞治療協會提出的三條定義間充質干細胞標準[2]，而缺乏針對某一類疾病，特別是免疫抑制方面的可以定義細胞質量或初步判斷細胞治療效果的方法。

為克服以上問題的不足，我們對脂肪干細胞表達的一種糖蛋白—galectin-3（半乳糖凝聚素-3）進行了系統研究，該蛋白是galectins（半乳糖凝聚素）家族的一員，分子量為26kD，大量研究表明該蛋白可有效抑制T淋巴細胞的增殖，促進T淋巴細胞的凋亡[3-7]。

我們在研究中發現脂肪干細胞（ADSC）與臍帶間充質干細胞（hUC-MSCs）相比，其在核酸水平和蛋白水平均有較高劑量的galectin-3表達，而且該蛋白在ADSC的表達又分為分泌型的和膜表達型；通過與hUC-MSC比較發現，ADSC在核酸水平和蛋白水平表達的galectin-3均較高，尤其流式細胞法檢測細胞膜表面表達galectin-3發現90%以上ADSC膜表達galectin-3陽性，顯著高于UC-MSC；而細胞培養液中分泌的galectin-3，ADSC則低于后者，說明細胞表面表達的galectin-3可能發揮更重要作用。我們通過Transwell小室共培養試驗發現，臍帶間充質干細胞加入或不加Transwell小室均能顯著抑制T淋巴細胞增殖，而脂肪干細胞加入Transwell小室后抑制淋巴細胞增殖能力明顯弱于細胞直接接觸組（不加Transwell小室組），以上實驗說明脂肪干細胞主要通過細胞直接接觸發揮免疫抑制功能。

我們通過RNA干擾試驗證實，ADSC膜表達的galectin-3明顯降低，而通過ADSC與淋巴細胞共培養時發現，經RNA干擾的ADSC抑制淋巴細胞增殖能力明顯弱于不進行galectin-3干擾的細胞，說明膜表達的galectin-3在脂肪干細胞免疫調節方面發揮主要作用，由此提出了一種檢測脂肪干細胞免疫抑制效力的新方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有脂肪干細胞生物學效力檢測手段的不足，建立一套有效檢測脂肪干細胞免疫抑制能力的新方法。

本發明提供了一種脂肪干細胞免疫抑制效力的檢測方法，其特征在于通過檢測脂肪干細胞表面galectin-3表達量來判斷其免疫抑制效力。

在一個特定的實施方案中，所述脂肪干細胞為人脂肪干細胞，并且其判斷標準為：人脂肪干細胞表面表達galectin-3陽性率在90%以上，低于此數值的判定為脂肪干細胞免疫抑制效力不合格。

優選地，使用流式細胞術方法檢測脂肪干細胞表面galectin-3表達量。