[發明專利]一種苦瓜多糖的提取方法

有效

• 申請號: 201210213148.4
• 申請日: 2012-06-26
• 公開（公告）號: CN102746412A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 李恒勇
• 申請（專利權）人: 安徽億源生物工程有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

1.一種苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：以苦瓜為原料，采用熱水浸提法或水提膜離法提取粗多糖，然后用Sevag法除蛋白質、雙氧水脫色，乙醇沉析分離，再經層析法純化，低溫干燥，粉碎，得多糖純品，具體步驟如下：

（1）熱水浸提法提取粗多糖??

a、備料：以新鮮的苦瓜為原料，洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；

b、水提：將經過粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入蒸餾水，攪拌混勻，微波處理1～2min或超聲波處理10～15min，于pH值7-8和溫度85-95℃左右的條件下浸提3-4h，過濾分離，得第一次浸提濾液，殘渣再加入適當的蒸餾水，攪拌，于95-100℃條件下浸提1-2h，過濾分離，得第二次浸提濾液，合并兩次浸提濾液，待用，浸提時料液比為1；（18-22）；

c?、濃縮：把浸提濾液投入真空濃縮器中，減壓、低溫濃縮至浸提濾液原體積1/4左右，得濃縮液，待用；

d、脫色：把苦瓜粗多糖濃縮液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量的濃度為20%～30%的雙氧水，混合均勻，靜置，脫色待用；

e、醇析：把脫色液投入醇析釜中，在攪拌的條件下，慢慢加入濃度為90-95%的乙醇，直至料液中乙醇體積濃度達到75%～85%為止，然后于-10～-15℃靜置過夜，醇析完全后，再進行離心分離，得下層沉析物為苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗滌苦瓜粗多糖，收集上層液相和洗液，回收乙醇；

f、干燥：把洗滌后的苦瓜粗多糖沉析物進行低溫干燥，然后粉碎，得到苦瓜粗多糖；

（2）粗多糖純化

a、溶解：把苦瓜粗多糖用適量的蒸餾水溶解，置于高速離心機中，收集上層清液，棄去下層物質；

b、除雜：在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入Sevag試劑震蕩，靜置，再離心分離，棄去下層雜質，收集上層液體，將收集的上層液體靜置待分層后，將水相與有機相分開,有機相回收氯仿和正丁醇循環使用，水相為苦瓜粗多糖澄清液，待用,?苦瓜粗多糖清液與Sevag試劑的體積比為：?1：（1-1.5）；

c、透析：把苦瓜粗多糖澄清液進行透析除雜，透析處理完畢后，取出透析內液，待用；

d、層析：把苦瓜粗多糖透析液經過DEAE-32柱層析純化，再上Sephadex?G-25柱分離，用氯化鈉水溶液洗脫，?收集含多糖的洗脫液，得苦瓜多糖純品洗脫液，待用；?

e、醇析：把含苦瓜多糖的層析液經適當的濃縮之后，進行醇析，再離心分離，收集的下層沉析物為苦瓜多糖，待用，液相的乙醇回收；

f、干燥：把苦瓜多糖沉析物洗滌后再進行低溫干燥處理，然后粉碎過80-85目篩，得到苦瓜多糖純品。

2.根據權利要求1所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：粗糖純化時所用的Sevag試劑中氯仿與正丁醇的體積比為=（4-5）：1?。

3.根據權利要求1所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：粗糖純化時所述的透析具體操作方法為：先用自來水透析45-50h，再用蒸餾水或去離子水透析22-25h。

4.根據權利要求1所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：所述的水提膜離法提取粗多糖的具體步驟如下：

a、備料：以新鮮的苦瓜為原料，?洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；

b、水提：粉碎的鮮苦瓜加入其重量的20%～50%的蒸餾水，于打漿機中勻漿，然后微波處理10min，適當的加熱，浸提1H左右，過濾，回收殘渣加以利用；得上清液，待用；

c、脫色：把上清液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量濃度為20%～30%的雙氧水，混合均勻，靜置，脫色，待用；

d、膜離;取褪脫色后的上清液，將其至于膜分離器中，在壓力為0.05～0.150MPa的條件下，使使上清液過截留分子量≥6000的中空纖維膜，得到苦瓜粗多糖的濃縮液，待用，采用熱水浸提法相同的方法醇析、干燥得干粗多糖。