[發明專利]致癌基因C-myc重組蛋白的壓電免疫傳感芯片及裝置

無效

• 申請號: 201210212502.1
• 申請日: 2012-06-26
• 公開（公告）號: CN102692513A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 曹忠;周婷;何婧琳;田雁飛;鄧婷;宋鋮;李嬌;張玲
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于腫瘤細胞中蛋白含量檢測技術領域，涉及一種用于檢測致癌基因C-myc重組蛋白的壓電免疫傳感芯片及其檢測裝置。

背景技術

C-myc基因是最早被發現的與腫瘤細胞增殖活性相關的原癌基因產物之一，主要與Max蛋白形成雜合體，然后轉移到細胞核與特異性DNA序列結合，從而抑制或激活許多靶基因的轉錄，導致細胞生長、分化和凋亡的改變。其過度表達易使細胞轉化為惡性表型，癌基因的活化或抑癌基因的失活均可啟動或加速腫瘤的發生。因此在線檢測C-myc含量的變化，對于癌癥的預防、診治有著非常重要的意義。

目前用于檢測C-myc的方法主要有：免疫組化法、原位雜交法、酶聯免疫分析法（ELISA)、熒光定量聚合酶鏈反應法（PCR）、熒光微流珠陣列法等。這些方法多為生物學方法，且所使用儀器價格昂貴、操作復雜、不適于在線檢測。與傳統的ELISA等方法僅能做到定性或半定量檢測相比，便攜、價廉的壓電石英晶體微天平因靈敏度高和選擇性好已廣泛用于生化分析領域，目前應用壓電傳感技術檢測病原菌等微生物的專利有ZL200410023232.5，ZL200710035069.8，ZL201010550114.5等，但是應用液相壓電免疫傳感手段檢測致癌基因C-myc重組蛋白的方法還沒有報道。因此本發明提供了一種基于自組裝傳感膜的單面起振的液相壓電免疫傳感芯片及其檢測裝置，可達到對癌變組織中C-myc重組蛋白含量的簡便、快速、靈敏檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測致癌基因C-myc重組蛋白的壓電免疫傳感芯片及其檢測裝置，其特征在于利用免疫反應結合引起壓電石英晶體振蕩頻率的變化來實現快速、簡便、定量地檢測癌變組織中C-myc重組蛋白的含量，即所述壓電免疫傳感芯片是通過固定于傳感芯片上的C-myc單克隆抗體和C-myc重組蛋白的免疫反應結合，引起壓電石英晶體振蕩頻率發生變化，與C-myc重組蛋白含量成線性響應關系而達到檢測目的。

為解決上述問題，本發明采用如下技術方案：

設計并制備了一種用于檢測致癌基因C-myc重組蛋白的壓電免疫傳感芯片，其特征在于所述壓電免疫傳感芯片的組裝結構自壓電石英晶體到最外層依次為：壓電石英晶體片的未封閉的單面金膜、L-半胱氨酸單分子層、戊二醛單分子層、C-myc單克隆抗體。

所述的壓電免疫傳感芯片的制備組裝過程是：首先將壓電石英晶體片的一側單面金膜用與晶體直徑相當的聚氯乙烯塑料管（管壁厚度為0.1?~?2?mm，管高度為1?~?10?mm）和聚對苯二甲酸類塑料片（厚度為0.01?~?0.5?mm）通過環氧樹脂AB膠作粘連劑封閉在一密閉空腔內，即封閉了壓電石英晶體片的一側單面金膜，得到其另一側未封閉的單面金膜；值得注意的是，壓電石英晶體的基頻為5?~?12?MHz，其振蕩形式為液相單面起振。然后，將Piranha溶液（注：Piranha溶液為濃硫酸：雙氧水=7：3的溶液）滴在壓電石英晶體片未封閉的單面金膜表面浸潤1?~?10?min，之后用二次蒸餾水反復沖洗；將上述步驟處理的單面金膜置于1?~?100?mmol/L?L-半胱氨酸(L-cys)中避光反應1~?24?h，形成L-半胱氨酸單分子層，之后用pH=7.4的10?mmol/L?PBS緩沖溶液沖洗，以優化L-半胱氨酸單分子層；隨后，將上述步驟處理的單面金膜置于0.1?~?10%?(W/W)的戊二醛溶液中活化1?~?120?min，用二次蒸餾水反復沖洗后就會在上述步驟處理的單面金膜表面形成戊二醛單分子層，再分別用0.1?~?10%（V/V）的乙二胺、0.1?~?10?mmol/L的巰基乙醇清洗上述步驟處理的單面金膜表面，以封閉非特異性結合位點；將上述步驟處理的單面金膜于C-myc單克隆抗體中在37℃下溫育1?~?120?min，取出用PBS緩沖溶液沖洗，即得C-myc單克隆抗體修飾的壓電免疫傳感芯片。

所述壓電免疫傳感芯片檢測裝置的組裝過程是：將溶液置于玻璃反應池中，玻璃反應池的底部放置一個磁性攪拌磁子，并置于磁力攪拌器上，在玻璃反應池的下端安裝一個放液管和一個開關閥門；隨后，將壓電石英晶體片未封閉的單面金膜浸入溶液中，通過金電極引腳與TTL振蕩電路連接，TTL振蕩電路再與頻率計數器相連接，構成一個完整的傳感檢測回路，輸出信號接入計算機，從而達到檢測的目的。