[發(fā)明專利]一種利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210208132.4
• 申請日: 2012-06-21
• 公開（公告）號: CN102719499A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉澤君;羅成
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：步驟如下：

⑴玉米秸稈水解液的制備：將玉米秸稈通過酸水解制得玉米秸稈水解液；

⑵脫毒處理；

向步驟⑴中的玉米秸稈水解液中加入Ca(OH)2，調(diào)pH至10-11，離心取上清液，用磷酸回調(diào)pH至6.0，離心取上清液，再將上清液滅菌、抽濾，所得濾液調(diào)pH至6.0，再次滅菌后備用；

⑶產(chǎn)油微生物的發(fā)酵培養(yǎng)：

向步驟⑵制得的玉米秸稈水解液中加入固液比g/mL為0.1-0.3%的(NH₄)₂SO₄，0.01-0.10%的酵母粉，0.05-0.2%的KH₂PO₄，0.01-0.05%的Mg₂SO₄·7H₂O，溶解后調(diào)pH至5.0，經(jīng)121℃、20min滅菌，作為發(fā)酵培養(yǎng)基；

向滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中接入產(chǎn)油微生物，接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的10-20%，在30℃、180r/min條件下培養(yǎng)96-144h，發(fā)酵結(jié)束后，離心收集菌體；

⑷微生物油脂提取：步驟⑶中菌體經(jīng)破碎、提取即得微生物油脂。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑴中玉米秸稈水解液的制備的具體步驟如下：

玉米秸稈經(jīng)清洗、烘干、粉碎后，過40目篩，按照玉米秸稈粉末與稀酸溶液的固液比g：mL為1:8-11的比例加入質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的稀硫酸溶液，于121℃高壓水解20min，3800r/min離心15min，即得玉米秸稈水解液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑵中Ca(OH)₂為Ca(OH)₂粉末。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑶中向步驟⑵制得的玉米秸稈水解液中加入固液比g/mL為0.2%的(NH₄)₂SO₄，0.05%的酵母粉，0.1%的KH₂PO₄，0.03%的Mg₂SO₄·7H₂O。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑶中的發(fā)酵培養(yǎng)基制備中調(diào)節(jié)pH所用的酸為鹽酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑶中的接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的15%。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑶中的產(chǎn)油微生物是圓紅冬孢酵母(Rhodosporidium?toruloides?As2.1389)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑶中的發(fā)酵時間為120h。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述步驟⑷中微生物油脂提取的具體步驟如下：

使用酸熱耦合超聲波法對菌體細胞進行破碎，即每克菌體加入10mL、4mol/L鹽酸，振蕩混勻，室溫下靜置30min后沸水浴3min，立即置于-20℃環(huán)境中速冷；取出后超聲破碎；將破碎后的菌體細胞按照固液比g：mL為1:2-5的比例加入體積比為1:1的乙醚：石油醚混合溶液萃取，充分振蕩后，超聲10min，抽濾，取濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑即得微生物油脂。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用玉米秸稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂的方法，其特征在于：所述破碎后的菌體細胞與乙醚：石油醚混合溶液的固液比g：mL為1:3。