[發明專利]檢測IBR病毒抗體的金標免疫滲濾試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201210204875.4
• 申請日: 2012-06-20
• 公開（公告）號: CN102692499A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 王武軍;徐淑菲;孔繁德;白泉陽;唐泰山;高麗欽;劉正才;黃一帆;鄭騰;張體銀
• 申請（專利權）人: 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種檢測IBR病毒抗體的金標免疫滲濾試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的組成包括：

a.??????牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原；

b.??????金標記羊抗牛抗體；

c.??????洗滌液；

d.??????封閉液。

2.根據權利要求1所述的檢測IBR病毒抗體的金標免疫滲濾試劑盒，其特征在于，所述牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原的制備方法如下：采用無血清培養方法在牛腎傳代細胞上培養牛傳染性鼻氣管炎病毒，將牛傳染性鼻氣管炎病毒的培養液反復凍融3次，5000?r/min離心30?min，取上清液裝入透析袋中，置于0.01?mol/L?pH7.4?PBS?緩沖液中透析，直至培養液透明清亮為止，然后將透析液濃縮。

3.根據權利要求1所述的檢測IBR病毒抗體的金標免疫滲濾試劑盒，其特征在于，所述封閉液為含10g/L酪蛋白、0.5mL/L吐溫-20的0.01?mol/L?pH7.2的PBS溶液或含5g/L酪蛋白、0.5mL/L?吐溫-20的0.01?mol/L?pH7.2的PBS溶液；所述洗滌液為含0.5ml/L?吐溫-20的0.01mol/L?pH7.2的PBS緩沖液。

4.一種利用權利要求1-3中任一種所述金標免疫滲濾試劑盒檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法，其特征在于：先將牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原點樣于硝酸纖維素膜上，用封閉液封閉后加待測血清樣品，洗滌液洗滌，然后加金標記羊抗牛抗體，洗滌液洗滌，觀察結果，若點樣處出現紅色斑點即為陽性，若不出現紅色斑點即為陰性。

5.根據權利要求4所述的利用金標免疫滲濾試劑盒檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法，其特征在于：在試劑盒內硝酸纖維素膜上對稱位置點樣如下：一點為牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原1μL作為檢測點，另一點為葡萄球菌A蛋白1μL作為質控點；室溫干燥后加入100μL封閉液；待封閉液干燥后，加入待檢血清50μL?－100μL；滲入后加入洗滌液洗滌；加金標記羊抗牛抗體100μL；滲入后加入洗滌液洗滌，洗去未結合的金標記羊抗牛抗體；5?min-10min?內若在硝酸纖維素膜上點樣處出現紅色斑點即為陽性，若不出現紅色斑點即為陰性，作為試驗有效的標志，質控點應出現紅色斑點，否則該膜無效，應重新點制膜。

6.根據權利要求4所述的一種利用金標免疫滲濾試劑盒檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法，其特征在于，所述金標記羊抗牛抗體采用檸檬酸三鈉還原法制備納米膠體金溶液，然后在納米膠體金溶液中加入羊抗牛抗體；其中所采用的重懸緩沖液為含10g/L牛血清白蛋白、0.5g/L聚乙二醇20?000、0.5mL/L?吐溫-20、0.01mol/L?PH7.2的PBS緩沖液；所采用的膠體金稀釋液為含10g/L?牛血清白蛋白、0.5g/L?聚乙二醇20?000、50g/L蔗糖、0.5mL/L?吐溫-20、0.01mol/L?PH7.2的PBS緩沖液。

7.根據權利要求5所述的一種利用金標免疫滲濾試劑盒檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法，其特征在于，所述點樣時牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原濃度為0.95?mg/mL－1.81mg/mL，葡萄球菌A蛋白濃度為1?g/?L。

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