[發明專利]一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗的效力檢驗方法

有效

• 申請號: 201210202292.8
• 申請日: 2012-06-15
• 公開（公告）號: CN102735807A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 劉月煥;楊保收;韓春華;何平有;林健;郁宏偉;朱秀同;劉浩;毛雅園;徐倩倩;趙際成;段會娟;潘潔;梁武
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院畜牧獸醫研究所;瑞普（保定）生物藥業有限公司
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/569
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術領域

本發明涉及一種獸用滅活疫苗的效力檢驗方法，尤其涉及一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力的檢驗方法，屬獸用生物制品檢驗技術領域。

背景技術

鴨出血性卵巢炎（Duck?Hemorrhagic?Ovaritis，DHO）是新近流行的、急性、高度接觸性的一種新型鴨傳染病，其病原為鴨出血性卵巢炎病毒（Duck?Hemorrhagic?Ovaritis?Virus，DHOV），在病毒分類上屬于黃病毒科的成員，感染不同日齡鴨，引起性成熟鴨卵巢出血、睪丸萎縮、產蛋量、受精率和孵化率下降，鴨死淘率增加。

在病毒分類地位的研究中，通過對分離病毒株的F4代鴨胚傳代病毒的基因組序列與已知的病毒進行序列同源性分析和進化分析，發現該病毒與黃病毒科黃病毒屬的坦布蘇病毒的遺傳距離最近。在診斷方面，曹貞貞、萬春和、蘇敬良、滕巧泱等人報道可以采用臨床癥狀、大體及組織病理變化、RT-PCR擴增和病毒分離等方法確診該病。關于該病的防控，北京市農林科學院和瑞普（保定）生物藥業有限公司、齊魯動物保健品有限公司、福建省農業科學院畜牧獸醫研究所和重慶市農科院畜牧獸醫研究所報道了利用該病暴發期間所分離的毒株制備疫苗的方法。林健、劉月煥等報道了利用產蛋鴨成功建立了鴨出血性卵巢炎的人工感染模型，為疫苗的評價奠定了實驗基礎。尚未見有客觀、可行、操作性強和科學的疫苗效力評價方法的詳細報道。

發明內容

本發明目的之一是提供一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力評價鴨的日齡范圍。

本發明目的之二是提供鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力評價用疫苗免疫次數、采樣時間、采集的組織樣本。

本發明目的之三是提供一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力評價方法。

本發明所用病毒毒株命名為鴨出血性卵巢炎病毒HB株，保藏號為CCTCC?V201122；所述鴨出血性卵巢炎病毒是ssRNA病毒，有囊膜，能夠凝集鴿紅細胞；病毒顆粒大體呈球狀，直徑40～60nm；所述病毒對外界環境的抵抗力較強，在4℃中存放幾周，在-20℃中存放幾個月，其感染力均不受影響；所述病毒對乙醚、氯仿敏感；大多數去污劑能將它迅速滅活；在37℃條件下，用0.1％福爾馬林熏蒸6h便可把它滅活。該病毒可在9～13日齡鴨胚尿囊腔、胚絨毛尿囊膜，9～10日齡雞胚尿囊腔、胚絨毛尿囊膜，6日齡雞胚卵黃囊，7～8日齡鴨胚卵黃囊中培養，也可在鴨胚成纖維細胞和BHK21細胞上培養。

本發明所用鴨出血性卵巢炎滅活疫苗的制備方法已于2011年申報發明專利，申請號為201110255115.1。

本發明提供一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力檢驗方法，該方法使用鴨出血性卵巢炎滅活疫苗免疫鴨，共免疫2次，首免后2周進行二免，采集二免后3~5周的鴨血清進行ELISA抗體檢測，非免疫對照組鴨ELISA抗體陽性率為0%，ELISA抗體陽性率為不低于80%判為疫苗效力檢驗合格。

進一步地，本發明方法根據易感性實驗結果，確定鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力檢驗用鴨的日齡為42~560日齡。

進一步地，本發明方法中2次免疫的劑量為0.5ml/只～2ml/只。

進一步地，本發明提供的一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力檢驗方法是使用鴨出血性卵巢炎滅活疫苗免疫42～560日齡鴨，首免后2周進行二免，采集二免后3~5周的鴨血清，使用ELISA抗體檢測試劑盒檢測免疫鴨血清，進行效力評價。

進一步地，上述ELISA抗體檢測是以純化的黃病毒科病毒為包被抗原的ELISA檢測試劑盒。

進一步地，所述的鴨為肉用鴨、蛋用鴨或SPF鴨。

本發明提供的一種鴨出血性卵巢炎滅活疫苗效力檢驗方法，具體是使用鴨出血性卵巢炎滅活疫苗免疫42～560日齡鴨，同時設一定數量的非免疫對照組鴨；首免后2周進行二免，兩次免疫的劑量均為0.5ml/只～2ml/只，采集二免后3~5周的鴨血清，使用ELISA抗體檢測試劑盒檢測免疫鴨血清，進行效力評價，非免疫對照組鴨ELISA抗體陽性率為0%，免疫組鴨ELISA抗體陽性率≥80%，判定疫苗效力檢驗合格。

進一步地，上述ELISA抗體檢測試劑盒是以純化的黃病毒科病毒為包被抗原的ELISA檢測試劑盒。

進一步地，所述的鴨為肉用鴨、蛋用鴨或SPF鴨。