[發明專利]一種秈稻組織培養的方法

無效

• 申請號: 201210199024.5
• 申請日: 2012-06-14
• 公開（公告）號: CN102715084A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 付永彩;王超杰;楊亞萍;韓冰;朱穎;李倩倩;孫傳清
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王慧鳳

技術領域

本發明涉及一種秈稻組織培養的方法。

背景技術

利用轉基因技術將外源優良基因導入植物是提高作物育種效率的重要途徑。然而要開展大規模的轉基因育種，必須具備一個良好的愈傷組織增殖和再生效率高的組織培養體系。水稻做為基因組研究的模式作物，遺傳轉化技術體系比較完善，但多數秈稻品種在愈傷組織繼代過程容易褐化，導致分化能力降低，盡管在外植體、培養基成分及培養條件等方面進行了大量研究，但迄今為止，適合不同秈稻品種的有效組織培養體系還未建立，嚴重影響了秈稻轉基因的研究與應用。

1、基本培養基類型對秈稻愈傷組織分化影響

易自立等人在實驗中證明CC培養基對秈稻的分化效果較好。曾桂萍在NB、MS₁、MS₂和NMB四種分化培養基的分化培養的對比實驗中，得出以下結果，MS₂培養基是最適合作秈稻分化的培養基，其次是NMB，再次是NB，效果最差的是MS₁。

2、植物激素對秈稻愈傷組織分化的影響

崔廣榮等以中秈898成熟種子為材料的研究結果顯示，NAA、6-BA的不同濃度組合對秈稻的分化成苗具有顯著作用。認為分化培養基中6-BA濃度為1.0mg/L，NAA濃度為0.5mg/L為最好。王亞琴等以秈稻不育系中A的種子為外植體的研究結果表明，添加外源激素3.0mg/L6-BA和0.5mg/LNAA有利于提高其分化率（王亞琴,梁承鄴.秈稻不育系中A完善再生系統的研究.中山大學學報（自然科學版）,2006,45(5)：81～84）。

張平等人分析幾種不同的激素配比對秈稻愈傷組織分化率的影響。結果表明，在分化過程中，以6-BA?2.0mg/L+NAA?0.5mg/L+KT?0.5mg/L的激素配方，其愈傷組織的分化率最高。尹福強等的實驗結果卻認為以6-BA?1.0mg/L+NAA?0.5mg/L+KT?1.0mg/L的激素配比效果為最佳，其愈傷組織現綠時間早、綠點多、分化頻率高（尹福強,劉銘,菜光澤,等.農桿菌介導轉化水稻成熟胚影響因素研究.西昌學院學報（自然科學版）,2005,19（4）：37～40）。

高三基等人的實驗表明，外加一定濃度的ABA對促進胚性愈傷組織的生長和胚狀體發生、發育具有一定作用，從而提高成熟胚愈傷組織的分化率（高三基,陳如凱,馬宏敏.影響秈稻成熟胚愈傷組織植株再生頻率的幾個因素.作物學報,2004,30(12)：1254～1258）。

3、微量元素對愈傷組織綠苗分化的作用

銅是植物正常生命活動所必需的微量元素。Yang等研究發現，在培養基中添加各種濃度為對照N6基本培養基的2倍的常量微量元素，結果顯示只有銅能明顯提高水稻成熟胚培養的愈傷組織植株再生頻率（YangYS，ZhengYD，ChenYL，et?a1.Improvement?of?plant?regeneration?from?long?term?cultured?calluses?of?Taipei309，a?model?rice?varieties?in?in?vitro?studies[J]．Plant?Cell?Tissue?Organ?Culture，1999，57：199-206）。

袁玲通過研究發現銅、銀元素能明顯提高水稻愈傷組織綠苗再生，而且使用濃度范圍較廣（2-20μmol/L），這給秈稻成熟胚培養的實際應用帶來了很大的方便。

4、干燥處理對水稻愈傷組織分化的影響

田文忠曾報道干燥處理能提高秈稻愈傷組織的再生頻率（田文忠．提高秈稻愈傷組織再生頻率的研究[J]．遺傳學報，1994，21(3)：215-221）。趙成章等人以浙733、廣陸矮4號、中優早2號等3個秈稻品種的成熟胚和秀水11、春江03、寶龍等3個粳稻品種的成熟胚的愈傷組織為試驗材料，干燥處理4天后再接種于分化培養基中，發現干燥處理均能提高水稻愈傷組織綠苗分化頻率，但各基因型間差異較大。對秈稻的效果比粳稻稍明顯（趙成章，吳連斌，楊長登，等．干燥處理對水稻愈傷組織綠苗再生和若干生理生化特性的影響[J]．作物學報，1997，23(1)：39-43）。肖向文等人以秈稻恢復系品種JH35的愈傷組織干燥處理2-5天，使其失水50%左右，再轉移到分化培養基中．獲得了59.4％的分化率，而對照處理只有43.5%的分化率。因此，在愈傷組織轉入分化培養基之前，可采用干燥處理的方式來提高秈稻成熟胚愈傷組織的分化率。

5、不同再生途徑對秈稻成熟胚愈傷組織分化的影響