[發(fā)明專利]鑒定豬優(yōu)良肉質(zhì)基因和/或營養(yǎng)活性物質(zhì)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210194859.1
• 申請日: 2012-06-13
• 公開（公告）號: CN102776280A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬曦;劉玫;張倩;劉璐;胡聲迪;李德發(fā)
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/02
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.用于鑒定或輔助鑒定豬營養(yǎng)活性物質(zhì)或/和豬肉質(zhì)基因的組合物，其特征在于：所述組合物由3T3-L1細(xì)胞、C2C12細(xì)胞、特異于AMPK-α基因的引物對1，以及特異于PGC-1α基因的引物對2組成；

所述特異于AMPK-α基因的引物對1由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成；所述特異于PGC-1α基因的引物對2由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成。

2.含有權(quán)利要求1所述組合物的試劑盒。

3.權(quán)利要求1所述組合物的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括將權(quán)利要求1所述組合物中各細(xì)胞分別單獨包裝，以及將各引物對的所述兩條單鏈DNA分別單獨包裝的步驟。

4.權(quán)利要求3所述試劑盒的制備方法，包括如下步驟：將權(quán)利要求1所述組合物中各細(xì)胞分別單獨包裝，以及將所述組合物中各引物對的所述兩條單鏈DNA分別單獨包裝后，與下述物質(zhì)中的至少一種包裝在同一試劑盒內(nèi)：PCR反應(yīng)緩沖液、DNA聚合酶和4種dNTP。

5.用權(quán)利要求1所述組合物鑒定或輔助鑒定待測物質(zhì)是否為豬肉質(zhì)改良的營養(yǎng)活性物質(zhì)的方法，包括如下步驟：將所述待測物質(zhì)分別與C2C12細(xì)胞和經(jīng)“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)的3T3-L1細(xì)胞共同孵育，檢測所述待測物質(zhì)是否抑制所述經(jīng)“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)的3T3-L1細(xì)胞的成脂分化，檢測所述待測物質(zhì)是否促進(jìn)所述C2C12細(xì)胞的成肌分化；若所述待測物質(zhì)同時滿足如下a）和b）對條件，則所述待測物質(zhì)為豬肉質(zhì)改良的營養(yǎng)活性物質(zhì)或候選為豬肉質(zhì)改良的營養(yǎng)活性物質(zhì)，若所述待測物質(zhì)不同時滿足如下a）和b）對條件，則所述待測物質(zhì)不為豬肉質(zhì)改良的營養(yǎng)活性物質(zhì)：

a）所述待測物質(zhì)抑制所述經(jīng)“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)的3T3-L1細(xì)胞的成脂分化；

b）所述待測物質(zhì)促進(jìn)所述C2C12細(xì)胞的成肌分化。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下步驟：將所述待測物質(zhì)分別與所述C2C12細(xì)胞和所述經(jīng)“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)的3T3-L1細(xì)胞共同孵育后，利用所述引物對1檢測所述3T3-L1細(xì)胞與所述待測物質(zhì)孵育后AMPK-α基因相對于所述經(jīng)“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)的3T3-L1細(xì)胞的表達(dá)量變化，利用所述引物對2檢測所述C2C12細(xì)胞與所述待測物質(zhì)孵育后PGC-1α基因相對于所述C2C12細(xì)胞的表達(dá)量變化；若所述待測物質(zhì)同時滿足所述a）和b）的條件，以及如下c）和d）的條件，則所述待測物質(zhì)為豬肉質(zhì)改良的營養(yǎng)活性物質(zhì)，若所述待測物質(zhì)滿足所述a）和b）的條件，但不滿足如下c）和d）的條件，則所述待測物質(zhì)候選為豬肉質(zhì)改良的營養(yǎng)活性物質(zhì)：

c）和所述經(jīng)“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)下3T3-L1細(xì)胞相比，與所述待測物質(zhì)孵育后所述3T3-L1細(xì)胞中所述AMPK-α基因的表達(dá)量降低；

d）和所述C2C12細(xì)胞比，與所述待測物質(zhì)孵育后所述C2C12細(xì)胞中所述PGC-1α基因的表達(dá)量提高。

7.用權(quán)利要求1所述組合物鑒定或輔助鑒定待測基因是否為豬優(yōu)良肉質(zhì)基因的方法，包括如下步驟：

（1）將所述待測基因分別導(dǎo)入3T3-L1細(xì)胞和C2C12細(xì)胞使其表達(dá)；

（2）對所述3T3-L1細(xì)胞進(jìn)行“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)；

（3）檢測所述待測基因是否抑制所述3T3-L1細(xì)胞在“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)下的成脂分化，檢測所述待測基因是否促進(jìn)所述C2C12細(xì)胞的成肌分化；

（4）按照如下方法確定所述待測基因是否為豬優(yōu)良肉質(zhì)基因：若所述待測基因同時滿足如下a）和b）的條件，則所述待測基因為豬優(yōu)良肉質(zhì)基因或候選為豬優(yōu)良肉質(zhì)基因，若所述待測基因不同時滿足如下a）和b）的條件，則所述待測基因不為豬優(yōu)良肉質(zhì)基因：

a）所述待測基因抑制所述3T3-L1細(xì)胞在所述“IBMX+胰島素+地塞米松”三聯(lián)誘導(dǎo)下的成脂分化；

b）所述待測基因促進(jìn)所述C2C12細(xì)胞的成肌分化。