[發(fā)明專利]一種測定糖化血紅蛋白百分比的試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210189180.3
• 申請日: 2012-06-08
• 公開（公告）號: CN102692411A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李子樵;孫明禮
• 申請（專利權(quán)）人: 上海藍(lán)怡科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥試劑，具體的說是一種測定糖化血紅蛋白百分比的試劑。

背景技術(shù)

由于血液中的糖化血紅蛋白反映了生物中血糖值過去的情況，因此被作為糖尿病的診斷和治療的重要指標(biāo)。對于檢測糖化血紅蛋白，例如：HPLC、電泳法、免疫法等。但是對于上述的HPLC法、電泳法，需要專用的儀器設(shè)備，檢測成本高昂，目前對于我國普及面不大，對于上述的免疫法等，成本雖然比較低，但是存在準(zhǔn)確度和靈敏度低的缺點(diǎn)。

因此，對于測定糖化血紅蛋白，酶法具備了不需要專用的儀器，檢測成本低，且通過特異性蛋白酶對糖化血紅蛋白切斷為糖化多肽及糖化氨基酸，并通過特異性的氧化還原反應(yīng)進(jìn)行顯色測定，因此準(zhǔn)確度及靈敏度都較高，穩(wěn)定性能較好。

采用的酶法測定糖化血紅蛋白百分比的方法，即首先，蛋白酶作用于糖化血紅蛋白，通過切下含β鏈N基末端的糖化纈氨酸或糖化多肽片段，在通過果糖基氨基酸氧化酶（FAOD）作用于上述切斷的糖化片段，產(chǎn)生過氧化氫。通過過氧化物酶的氧化作用和顯色劑的顯色反應(yīng)得到的過氧化氫的量與上述糖化血紅蛋白的百分比成正比例關(guān)系。目前測定糖化血紅蛋白百分比用的比較多的方法是在雙通道測定糖化血紅蛋白百分比，即反應(yīng)分兩步進(jìn)行，第一步反應(yīng)是測定樣本中的總血紅蛋白的量，第二步反應(yīng)是測定樣本中糖化血紅蛋白的量，最后得到兩步反應(yīng)后數(shù)值的比值，即糖化血紅蛋白的百分比，這種形式對于儀器需要占用兩個通道，這樣的方法對于醫(yī)院的應(yīng)用帶來了很多的不便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種測定糖化血紅蛋白百分比的試劑。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明設(shè)計了一種測定糖化血紅蛋白百分比的試劑，其特征在于：由以下物質(zhì)組成，

（a）從血液樣品中的紅細(xì)胞釋放血紅蛋白的溶解緩沖劑；

（b）能夠切斷糖化血紅蛋白β鏈N基末端的糖化纈氨酸或糖化多肽片段的蛋白酶；

（c）能夠氧化并消除樣本中干擾物質(zhì)的氧化劑；

（d）能夠?qū)⒀t蛋白變性并且能夠加快蛋白酶反應(yīng)速率的氧化劑；

（e）能夠加快蛋白酶反應(yīng)速率的加速反應(yīng)劑；

（f）與物質(zhì)a中能夠切斷糖化血紅蛋白β鏈N基末端的糖化纈氨酸或糖化多肽片段進(jìn)行氧化還原反應(yīng)的果糖基氨基酸氧化酶；

（g）能夠與產(chǎn)生的過氧化氫發(fā)生顯色反應(yīng)的顯色劑；

（h）能夠催化過氧化氫和顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)的過氧化物酶。

所述物質(zhì)a中的緩沖劑為TritonX-100、Tween-20、Brij35中的一種；添加的濃度為0.1%-1%的重量，室溫下靜置3-10分鐘即可溶血完全。

所述物質(zhì)b中的蛋白酶為木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、蛋白酶K、豬胰蛋白酶、氨肽酶、嗜熱菌蛋白酶、蛋白酶E、中性蛋白酶、彈性蛋白酶中的一種；蛋白酶的濃度范圍為100-5000KU/L。

所述物質(zhì)c中的氧化劑是戴斯馬丁氧化劑或者高碘酸鈉，其濃度范圍為0.5-10mmol/L。

所述的物質(zhì)d中的氧化劑為四唑鎓鹽。

所述的四唑鎓鹽是2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑鹽、2-（4-碘苯基）-3-（2，4-二硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑鹽、2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑鹽、2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基-2H-四唑鹽、2，5-二苯基-3-（間甲苯基）四唑鹽、2，5-二苯基-3-（對甲苯基）四唑鹽、2，3-二苯基-5-（2-噻吩基）四唑鹽、鐵氰化鉀、碘酸鉀。其中優(yōu)選2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑鹽、2-（4-碘苯基）-3-（2，4-二硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑鹽中的一種，其濃度范圍為0.05-10mmol/L。

所述物質(zhì)e中的加速反應(yīng)劑為葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、正十二烷基-β-D-麥芽糖、亞硝酸鉀、亞硝酸鈉、硝基苯中的一種，其濃度范圍為0.01-1mmol/L。

所述物質(zhì)f中果糖基氨基酸氧化酶是純化的或是重組產(chǎn)生的。

所述果糖基氨基酸氧化酶為作用于a-氨基被糖化的氨基酸或肽，同時催化產(chǎn)生過氧化氫的酶，其濃度為0.2-100KU/L。

所述物質(zhì)h中的過氧化物酶為辣根過氧化物酶，其濃度范圍為20-800KU/L。