[發明專利]一株組成型表達精氨酸酶的基因工程菌株及其應用

無效

• 申請號: 201210177959.3
• 申請日: 2012-06-01
• 公開（公告）號: CN102703370A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 張奇;楊潔;李鳴;白芳;白鋼
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P13/10;C12R1/19
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一株組成型表達精氨酸酶的基因工程菌株，其特征在于該菌株是在能夠誘導表達精氨酸酶的重組表達載體pET21a(+)-ARG基礎上，通過自殺質粒pRE112，構建重組載體pRE112-ARG，將其轉化至不能表達π蛋白的宿主細胞E.coli?DH5α，并通過氯霉素（Cm）抗性篩選，獲得的組成型表達精氨酸酶的基因工程菌株E.coli?DH5α-ARG。

2.根據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于：所述的自殺質粒pRE112與宿主細胞染色體發生重組，使精氨酸酶I基因可組成型表達。

3.根據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于：所述的自殺質粒pRE112的復制及轉化載體的制備和篩選在E.coli?S17λpir^A宿主細胞進行。

4.權利要求1所述的基因工程菌株E.coli?DH5α-ARG在L-鳥氨酸和D-精氨酸制備中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：以組成型表達精氨酸酶的E.coli?DH5α-ARG菌體作為酶源，以L-精氨酸為底物進行酶促反應，酶源細胞催化條件為1~5g/L，轉化溫度為20~80℃；轉化pH值為6~11；Mn²⁺濃度為0.1mM~2mM。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：在優選溫度為60℃；優選轉化pH值為9.0；優選Mn²⁺濃度為0.5mM的最適反應條件下，2g/L酶源細胞催化，當底物L-精氨酸濃度為100g/L時，反應12h，底物L-精氨酸的轉化率為98.17%。