[發明專利]γ?球蛋白的檢測方法

有效

• 申請號: 201510367483.3
• 申請日: 2015-06-26
• 公開（公告）號: CN105115945B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 張萍;卓舒娟;朱昌青
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司11283
• 代理人: 董彬

技術領域

本發明涉及生物體內蛋白質的檢測方法，具體地，涉及一種γ-球蛋白的檢測方法。

背景技術

血清球蛋白由人體單核-吞噬細胞系統合成，它經過蛋白電泳可分為α1-、α2-、β1-、β2-和γ-球蛋白。而γ-球蛋白也稱為丙類球蛋白，是具有抗體活性并能與相應抗原特異地結合的一類球蛋白，也是肝功能檢查中一項重要指標，γ-球蛋白的偏高幾乎見于所有肝膽疾病。當患者是病毒性肝炎時，γ-球蛋白會中度增高；當患者是重型肝炎時，γ-球蛋白可明顯升高；當患者是肝硬化時，γ-球蛋白普遍增高，尤其在晚期或進行性失代償肝硬化，γ-球蛋白可極度增高。目前常見的由免疫球蛋白異常引發的疾病有原發性免疫缺陷病和變異性免疫缺陷癥。因此根據體內γ-球蛋白的含量變化可以快速的得出肝功能有沒障礙，盡可能的減少肝膽疾病所帶來的風險。

目前針對γ-球蛋白的測定方法已經被提出來，這其中包括考馬斯亮藍法和溴酚藍法。在這些方法中，由于敏感度、重復度等不夠高，因此在實際應用時具有一定的局限性和不穩定性。一般的熒光分光光度法在實際測試中由于各類蛋白質結構特性的相似性等會不可避免的出現很多干擾，而且短波發射也會導致很多不必要的信號干擾。

因此，提供一種靈敏度高、穩定性好且具有較好的可重復性，并且操作簡單，能快速測得γ-球蛋白的濃度的γ-球蛋白的檢測方法是本發明亟需解決的問題。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的在于克服現有技術中γ-球蛋白在測定過程中，往往會由于各類蛋白質結構特性的相似性從而不可避免的出現很多干擾，同時短波發射也會導致很多不必要的信號干擾等問題，從而提供一種靈敏度高、穩定性好且具有較好的可重復性，并且操作簡單，能快速測得γ-球蛋白的濃度的γ-球蛋白的檢測方法。

為了實現上述目的，本發明提供了一種γ-球蛋白的檢測方法，其中，所述檢測方法包括：

(1)將如式(I)所示結構的聚合物PPEASO₃溶于水中制得溶劑；

(2)將不同濃度的γ-球蛋白標準溶液置于步驟(1)制得的溶劑中，并加水和緩沖溶液定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大熒光強度；

(3)以溶劑的熒光發射峰的熒光強度和待測溶液的熒光發射峰的熒光強度的比值為縱坐標，γ-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立熒光吸收光譜曲線的方程；

(4)檢測待測濃度的γ-球蛋白溶液的最大熒光強度，然后根據熒光吸收光譜曲線的方程計算待測濃度的γ-球蛋白溶液中γ-球蛋白的濃度；

其中，n為正整數。

通過上述技術方案，本發明將聚合物PPEASO₃溶于水中制得溶劑，而后通過該溶劑及緩沖溶液與不同濃度的γ-球蛋白標準溶液混合，再定容制得待測溶液，并測定上述待測溶液的最大熒光強度，并以溶劑的熒光發射峰的熒光強度和待測溶液的熒光發射峰的熒光強度的比值為縱坐標，γ-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立熒光吸收光譜曲線方程，最后測定需要檢測的γ-球蛋白溶液的最大熒光強度，并根據上述熒光吸收光譜曲線方程計算得到γ-球蛋白的濃度，從而通過這種方式，將熒光吸收光譜曲線方程建立出來后，則僅需要測定一次最大熒光強度，即可得到需要檢測的γ-球蛋白溶液的濃度，實現了靈敏度高、穩定性好且具有較好的可重復性，并且操作簡單，能快速測定γ-球蛋白溶液的濃度的效果。

本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

附圖說明

附圖是用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本發明，但并不構成對本發明的限制。在附圖中：

圖1是實施例中所提供的各濃度的γ-球蛋白溶液的熒光強度圖譜；

圖2是實施例中所提供的一種熒光吸收光譜曲線的方程；

圖3是實施例在不同溫度下制得的熒光吸收光譜曲線的方程；

圖4是實施例中PPEASO₃溶液在不同濃度下的γ-球蛋白存在時的熒光衰減情況。

具體實施方式

以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。

本發明提供了一種γ-球蛋白的檢測方法，其中，所述檢測方法包括：

(1)將如式(I)所示結構的聚合物PPEASO₃溶于水中制得溶劑；