[發明專利]與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記及其應用

有效

• 申請號: 201210175477.4
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN102676514A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 張勤;劉劍鋒;張勝利;王海飛;趙紅梅
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

技術領域

本發明涉及基因工程及分子生物學領域，具體地說，涉及一種與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記及其應用。?

背景技術

奶業的發展對于改善人們的膳食結構，增強國民體質，促進經濟發展等方面，都具有重要作用。奶牛產業是奶業發展的龍頭產業，而我國奶牛產業的發展水平明顯落后于世界發達國家，總產奶量占世界總量的不足6％，人均占有量僅為世界平均水平的四分之一，奶牛單產不到世界發達國家的一半。以擴充奶牛數量提高產奶總量的傳統發展模式易受到空間和發展規模的限制，影響了奶農養殖的積極性。因此，培育高產奶牛群體已成為我國奶牛產業發展的關鍵。只有不斷改良奶牛群體的遺傳水平，才能從根本上提高其經濟性狀的生產性能，從而促進我國奶牛產業持續健康發展。?

隨著分子數量遺傳學、分子生物學技術的飛速發展，有關分子遺傳標記和標記輔助選擇的研究被廣泛開展，并在畜禽育種中應用，產生了巨大的影響。PCR-RFLP(PCR-Restriction?Fragment?Length?Polymorphism)是在PCR技術基礎上發展起來的，其基本原理是用PCR擴增目的DNA片段，擴增產物用特異性限制性內切酶消化切割成不同大小片段，直接利用凝膠電泳圖進行分析。不同等位基因的限制性酶切位點分布不同，產生不同長度的DNA片段條帶，從而達到鑒定不同基因型的目的。?

分子育種，即分子標記輔助選擇育種，是指利用DNA分子標記對育種材料進行選擇，綜合改良畜禽重要經濟性狀，是傳統遺傳育種與現代分子生物學有機結合的育種方法。分子育種為家畜育種開辟了一?條新的途徑，隨著現代生物技術的發展，分子標記在家畜育種中的作用將日益突出。在奶牛育種中，人們希望選擇與產奶性狀密切相關，且與數量性狀緊密連鎖的DNA標記，以實現早期選種和提高育種準確性的目標，從而加快遺傳育種進程。?

發明內容

本發明的目的是提供一種與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記及其應用。?

本發明的另一目的是提供用于檢測所述與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記的引物及含有該引物的試劑盒。?

為了實現本發明目的，本發明的一種與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記，其位于中國荷斯坦奶牛PTK2基因如SEQ?ID?NO.1所示序列的227bp處，此處堿基為T的中國荷斯坦奶牛的產奶量、乳蛋白含量顯著高于此處堿基為G的中國荷斯坦奶牛，而乳脂率前者顯著低于后者。?

本發明還提供用于檢測上述與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記的引物，包括正向引物F5’-TCTGAATCTGCCTCATAAC-3’和反向引物R5′-CTGCTCCGTCTGTGCT-3′。?

本發明還提供上述與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記在鑒定產奶量高的中國荷斯坦奶牛優勢品種中的應用，其包括步驟：1)提取待測中國荷斯坦奶牛的基因組DNA；2)以待測中國荷斯坦奶牛的基因組DNA為模版，利用所述引物F和R，通過PCR反應擴增出中國荷斯坦奶牛PTK2基因496bp片段；3)檢測PCR擴增產物，如果擴增產物序列中227bp處的堿基為T，則待測中國荷斯坦奶牛屬于產奶量高的中國荷斯坦奶牛優勢品種。?

前述應用中，步驟2)中PCR反應使用的擴增體系以25μl計為：50ng/μl模板DNA1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L?dNTPmix2.0μl，5U/μL?Taq?DNA聚合酶0.125μl，10×PCR反應緩沖液2.5μl，余量為水。?

前述應用中，步驟2)中PCR反應的條件為：94℃5分鐘；94℃30秒，47.5℃35秒，72℃35秒，34個循環；72℃10分鐘。?

前述應用中，步驟3)中檢測PCR擴增產物采用RFLP法，具體為：用內切酶NlaIII對PCR擴增產物進行酶切，并對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，如果檢測結果僅為一條帶，則待測中國荷斯坦奶牛屬于產奶量高的中國荷斯坦奶牛優勢品種，檢測結果出現兩條帶，則待測中國荷斯坦奶牛屬于普通品種。?

本發明還提供含有所述引物F和R的用于檢測中國荷斯坦奶牛產奶性狀的試劑盒。所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的一種或多種。優選所述試劑盒還包括標準陽性模板。?

本發明進一步提供所述與中國荷斯坦奶牛產奶性狀相關的SNP標記在中國荷斯坦奶牛分子標記輔助育種中的應用。?