[發(fā)明專利]與中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210175477.4
• 申請日: 2012-05-30
• 公開（公告）號: CN102676514A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張勤;劉劍鋒;張勝利;王海飛;趙紅梅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種與中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記，其特征在于，其位于中國荷斯坦奶牛PTK2基因如SEQ?ID?NO.1所示序列的227bp處，此處堿基為T的中國荷斯坦奶牛的產(chǎn)奶量、乳蛋白含量顯著高于此處堿基為G的中國荷斯坦奶牛，而乳脂率前者顯著低于后者。

2.用于檢測權(quán)利要求1所述與中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記的引物，其特征在于，包括正向引物F5’-TCTGAATCTGCCTCATAAC-3’和反向引物R5′-CTGCTCCGTCTGTGCT-3′。

3.權(quán)利要求1所述與中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記在鑒定產(chǎn)奶量高的中國荷斯坦奶牛優(yōu)勢品種中的應(yīng)用，其包括步驟：

1)提取待測中國荷斯坦奶牛的基因組DNA；

2)以待測中國荷斯坦奶牛的基因組DNA為模版，利用權(quán)利要求2所述引物F和R，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增出中國荷斯坦奶牛PTK2基因496bp片段；

3)檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，如果擴(kuò)增產(chǎn)物序列中227bp處的堿基為T，則待測中國荷斯坦奶牛屬于產(chǎn)奶量高的中國荷斯坦奶牛優(yōu)勢品種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟2)中PCR反應(yīng)使用的擴(kuò)增體系以25μl計為：50ng/μl模板DNA1μl，10pmol/d引物F和R各1μl，10mmol/L?dNTP?mix2.0μl，5U/μL?Taq?DNA聚合酶0.125μl，10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5μl，余量為水。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟2)中PCR反應(yīng)使用的條件為：94℃5分鐘；94℃30秒，47.5℃35秒，72℃35秒，34個循環(huán)；72℃10分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟3)中檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用RFLP法，具體為：用內(nèi)切酶NlaIII對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，并對酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，如果檢測結(jié)果僅為一條帶，則待測中國荷斯坦奶牛屬于產(chǎn)奶量高的中國荷斯坦奶牛優(yōu)勢品種，檢測結(jié)果出現(xiàn)兩條帶，則待測中國荷斯坦奶牛屬于普通品種。

7.含有權(quán)利要求2所述引物的用于檢測中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶性狀的試劑盒。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應(yīng)緩沖液中的一種或多種。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)陽性模板。

10.權(quán)利要求1所述與中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記在中國荷斯坦奶牛分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。