[發(fā)明專利]KRGD肽修飾的咔啉并六氫吡嗪-1,4-二酮、其制備方法、抗血栓作用和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210173582.4
• 申請(qǐng)日: 2012-05-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103450336A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙明;彭師奇;王玉記;吳建輝;韓爽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K1/06;C07D471/14;A61K31/4985;A61P7/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及通式1代表的(R代表Lys-Arg-Gly-Asp-Val，Lys-Arg-Gly-Asp-Phe和Lys-Arg-Gly-Asp-Ser)咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮與RGD肽的三種新型綴合物，以及它們的雜環(huán)核(R代表OH)，涉及它們的制備方法，還涉及它們的體外抗血小板聚集作用，進(jìn)一步涉及它們?cè)诖笫笱ㄐ纬赡Ｐ蜕系目寡ㄗ饔谩＝Y(jié)果表明，本發(fā)明的通式1的(R代表Lys-Arg-Gly-Asp-Val，Lys-Arg-Gly-Asp-Phe和Lys-Arg-Gly-Asp-Ser)咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮與RGD肽的三種新型綴合物以及它們的雜環(huán)核(R代表OH)具有良好的抗血栓活性，在抗血栓劑的制備中有明確的應(yīng)用前景。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

在全球范圍內(nèi)，血栓性疾病的發(fā)病率和死亡率都居首位。血栓患者體內(nèi)的血栓有兩種，一種是由血小板通過(guò)纖維蛋白原與白血球交聯(lián)構(gòu)成的血栓，另一種是由血小板通過(guò)纖維蛋白原與血小板交聯(lián)構(gòu)成的血栓。?

P-選擇素以溶解型P-選擇素和不溶型P-選擇素兩種形態(tài)存在。在血小板活化狀態(tài)下，不溶型P-選擇素從血小板內(nèi)膜層快速移動(dòng)到活化的血小板的表面表達(dá)并被切割為溶解型P-選擇素進(jìn)入血液循環(huán)。溶解型P-選擇素介導(dǎo)形成大量穩(wěn)定的由血小板通過(guò)纖維蛋白原與白血球交聯(lián)構(gòu)成的血栓。雖然抑制不溶型P-選擇素表達(dá)并被切割為溶解型P-選擇素被認(rèn)為是是設(shè)計(jì)抗血栓藥物的重要靶點(diǎn)，但是幾乎沒(méi)有抗血栓化合物與這個(gè)靶點(diǎn)相關(guān)聯(lián)。這種狀況使得發(fā)明人把尋找抑制不溶型P-選擇素表達(dá)并被切割為溶解型P-選擇素的化合物作為重要研究方向。在合理設(shè)計(jì)和廣泛的篩選結(jié)果的支持下，結(jié)構(gòu)式II代表的咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮-3-乙酸被確定為先導(dǎo)化合物之一。實(shí)驗(yàn)研究表明，在10^-8M濃度下它能夠使大鼠活化的血小板表達(dá)P-選擇素的量從210.55±2.98ng/ml降低到110.12±3.96ng/ml(p＜0.001)。?

血小板被激活時(shí)糖蛋白IIb/IIIa外化，與纖維蛋白原結(jié)合，使血小板通過(guò)纖維蛋白原與血小板交聯(lián)構(gòu)成血栓。研究糖蛋白IIb/IIIa與纖維蛋白原α鏈及纖維蛋白原γ鏈的結(jié)合方式，確定了RGDS，RGDV和RGDF是血小板聚集過(guò)程中導(dǎo)致纖維蛋白原被糖蛋白IIb/IIIa識(shí)別并與纖維蛋白原結(jié)合的關(guān)鍵序列。采用RGDF或RGDS或RGDV的相關(guān)序列占據(jù)血小板活化狀態(tài)下糖蛋白IIb/IIIa上纖維蛋白原的結(jié)合位點(diǎn)是抑制由血小板通過(guò)纖維蛋白原與血小板交聯(lián)構(gòu)成的血栓的重要手段。?

在獲得了結(jié)構(gòu)式II代表的咔啉并六氫吡嗪-1，4-二酮-3-乙酸在10^-8M濃度下能有效抑制大鼠活化的血小板表達(dá)P-選擇素這樣一個(gè)突破之后，把RGD肽的類似物KRGD肽與之結(jié)合就成為發(fā)明人創(chuàng)造抑制溶解型P-選擇素介導(dǎo)的由血小板通過(guò)纖維蛋白原與白血球交聯(lián)構(gòu)成的血栓和抑制糖蛋白IIb/IIIa介導(dǎo)的血小板通過(guò)纖維蛋白原與血小板交聯(lián)構(gòu)成的血栓的新型抗血栓劑的核心創(chuàng)新和關(guān)鍵技術(shù)。這種核心創(chuàng)新和關(guān)鍵技術(shù)的進(jìn)步必然使本發(fā)明的化合物的抗血栓有效劑量大幅度下降。于是，發(fā)明人提出了本發(fā)明。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的之一是提供通式I的四種化合物，式中R為OH，Lys-Arg-Gly-Asp-Val，Lys-Arg-Gly-Asp-Phe或Lys-Arg-Gly-Asp-Ser。?

本發(fā)明的內(nèi)容之二是提供合成通式I代表的化合物的方法，該方法包括：?

(1)制備3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸；?

(2)制備3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯；?

(3)將3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯與Boc-Asp(OBzl)偶聯(lián)，制得3S-N-[Boc-Asp(OBzl)]-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯；?

(4)從3S-N-[Boc-Asp(OBzl)]-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯脫Boc制得的?3S-N-[Asp(OBzl)]-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯鹽酸鹽制備(3S，12aS)-3-芐氧羰基-2，3，6，7，12，12a-六氫吡嗪并[1’，2’:1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；?