[發(fā)明專利]檢測PJVK基因c.740G>T突變的試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210171763.3
• 申請(qǐng)日: 2012-05-29
• 公開（公告）號(hào): CN102732617A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秋菊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 王秋菊;中國人民解放軍總醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測領(lǐng)域，具體涉及用于檢測PJVK基因突變基因的試劑盒；本發(fā)明還涉及PJVK突變基因及其在診斷和/或治療感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙(Auditory?Neuropathy?Spectrum?Disorders,ANSD)是一種耳蝸外毛細(xì)胞功能正常，但聲音信號(hào)不能同步地從內(nèi)耳傳輸?shù)酱竽X的聽覺障礙性疾病，系聽覺信息傳輸處理過程的異常。聽力學(xué)檢查表現(xiàn)為以低頻聽力減退為主的聽力損失，聽性腦干反應(yīng)不能引出，耳蝸微音電位和耳聲發(fā)射多正常。該類疾病于上個(gè)世紀(jì)90年代被定義和命名，是一種新認(rèn)識(shí)的聽力障礙性疾病，在高危嬰幼兒中的發(fā)病率約為0.23%,在各種原因所致的ABR異常的聾病患兒中發(fā)病率則高達(dá)11%,是導(dǎo)致嬰幼兒和青少年言語交流障礙的重要聽力障礙性疾病之一。然而，其病因、病變部位和發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，導(dǎo)致藥物治療、佩戴助聽器及人工耳蝸植入術(shù)效果的預(yù)測和評(píng)估上存在難度。近幾年來，一系列感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)，從分子水平揭示了感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙的病理機(jī)制。根據(jù)不同基因?qū)е碌牟煌∽儾课粚?duì)感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙進(jìn)行分型，可為感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙的臨床治療提供理論依據(jù)。

Starr教授等根據(jù)聽神經(jīng)病譜系障礙發(fā)病部位的不同將其分為TYPE?I型（病變部位在聽神經(jīng)）和TYPE?II型（病變部位在內(nèi)毛細(xì)胞、末梢樹突及突觸）國內(nèi)外研究顯示攜帶OTOF基因突變的聽神經(jīng)病譜系障礙患者臨床多以TypeII型表現(xiàn)為主，適合于人工耳蝸植入并可取得較好效果。而攜帶PJVK基因突變的聽神經(jīng)病譜系障礙患者臨床多以TYPE?I型為主，其病變部位在聽神經(jīng)，位置深在，人工耳蝸植入術(shù)效果欠佳。

PJVK基因是與非綜合征型隱性遺傳性感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙相關(guān)的基因。由Del?maghani等于2006年首次發(fā)現(xiàn)并命名,也稱為DFNB59基因,位于染色體2q31.1～2q31.3區(qū)域,DNA序列全長9800bp,含有7個(gè)外顯子,其中第一個(gè)外顯子為非編碼外顯子。該基因的編碼區(qū)序列，含終止子如SEQ?ID?NO.1所示，編碼由352個(gè)氨基酸組成的蛋白pejvakin（如SEQ?ID?NO.2所示）,其中第249～258位氨基酸形成核定位信號(hào)基序(nuclear?localization?signal,NLS),第305～331位氨基酸形成一種可以與DNA相互作用的鋅指結(jié)構(gòu)(zinc-binding?domains)。Pejvakin蛋白主要表達(dá)于耳蝸Corti器、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以及前三級(jí)聽覺傳入通路(耳蝸核、上橄欖復(fù)合體、下丘)的神經(jīng)元細(xì)胞中，所致感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙的病變部位主要位于聽覺傳導(dǎo)通路，影響動(dòng)作電位的傳導(dǎo)及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)交換。自2006年首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道PJVK基因至今,學(xué)者們分別在伊朗、摩洛哥、土耳其及荷蘭等患者中發(fā)現(xiàn)了該基因的10余種突變，但少見我國感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙患者該基因的突變報(bào)道。申請(qǐng)人所在課題組針對(duì)150名感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙患者率先開展了該基因的篩查，并發(fā)現(xiàn)我國人群特有的c.740G>T突變，進(jìn)而研發(fā)了檢測該基因c.740G>T突變的試劑盒。該成果有助于快速、高效地在更大范圍的感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙人群中進(jìn)行突變位點(diǎn)的檢測，進(jìn)而對(duì)其定位分型，為感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙患者開展臨床干預(yù)提供重要的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供用于檢測PJVK突變c.740G>T基因的試劑盒，其技術(shù)方案為：

一種用于檢測與感音神經(jīng)性聾及聽神經(jīng)病/聽神經(jīng)病譜系障礙相關(guān)的位于PJVK基因的c.740G>T突變的試劑盒，所述試劑盒包括:

從待測樣品中提取DNA的試劑；

用于擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑；

對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測的試劑；

其中，所述擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑包括PCR引物，所述PCR引物擴(kuò)增的目標(biāo)片段包含PJVK基因第740位堿基。

具體地，上述PCR引物為選自：

PJVK-6F-1（SEQ?IDN?O.3）:5’-TCATCACCCCATCAAACAAT-3’，

PJVK-6R-1（SEQ?ID?NO.4）:5’-TTGCCCAAGTGTTTCAAACT-3’；